LPO脂质过氧化物检测试剂盒怎么选？从检测对象到实验设备的选购要点

搜索“脂质过氧化”时，经常会看到一串名字相近的试剂盒：LPO、MDA、TBARS、4-HNE、脂质 ROS……看起来都和氧化应激有关，但真正下单时，很容易卡在“我的实验到底该测哪个”。

有时指标选对了，买回来又会碰到别的问题：酶标仪少一个波长，细胞样本不够跑复孔，或者某瓶试剂临用前还要加热助溶。

所以选 LPO试剂盒，不能只看产品名称。这篇文章按实际选购时会遇到的问题来讲：测什么指标、什么样本、检测范围够不够、一次能跑多少、实验室设备是否匹配、试剂怎么配、结果怎么表示，以及是否需要搭配其他氧化应激指标。最后再用这套标准看一款具体产品——亚科因 CheKine™ KTB1051，看看它更适合哪些实验。

一、先确定要测的是 LPO、MDA，还是其他指标

脂质过氧化是一个连续过程。多不饱和脂肪酸受到自由基或活性氧攻击后，会先生成脂质氢过氧化物（LPO），通常视为初级产物；这些产物继续降解后，又会产生丙二醛（MDA）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）等醛类次级产物。

测的指标不同，反映的是脂质过氧化过程中的不同阶段，能采用的检测方法也不同。

此外，还有铁氧化—二甲酚橙（FOX）这类直接针对氢过氧化物的比色方法。检测思路不同，但同样可以用于比色定量。

具体选哪个，可以先看三件事：研究问题需要哪个阶段的指标；准备对照的文献或课题组既往数据测的是什么；现有样本量和设备能支持哪种方法。

如果所在领域通常用 MDA 作为氧化应激的常规读数，直接选择丙二醛（MDA）检测试剂盒会更方便，亚科因 MDA试剂盒货号为 KTB1050。如果实验需要报告的是 LPO，则应选择 LPO 检测试剂盒。

LPO 和 MDA 回答的问题并不完全相同，不建议把两者当成可以互换的名称。如果课题既想观察上游的脂质过氧化物，又想看后续降解产物，也可以并列检测，并在方法部分分别写清检测原理，在讨论中说明两项结果各自代表什么。

需要注意的是，KTB1051 的读数本身经过 MDA 显色，因此 LPO 和 MDA 两项结果不一定能作为彼此完全独立的证据。是否需要同时检测，要结合研究问题和具体方法判断。拿不准时，可以把样本类型和实验目的整理好，再拨打技术支持电话 400-6800-830 咨询。

二、样本类型和用量：一份样本到底够测几管？

先确认试剂盒是否有对应的样本处理方案。动植物组织、培养细胞、血清（浆）和其他液体样本的前处理方式差别较大，不能只看产品页上笼统写着“适用于组织、细胞和体液”。

另一个经常被忽略的问题是样本消耗量。

下单前可以按下面的思路估算：

每个反应的样本量 × 复孔数 + 预实验 + 备份 + 蛋白定量所需样本量。

以 KTB1051 为例，每个反应需要加入 100 µL 样本。

组织样本按约 0.1 g 加 1 mL 提取液匀浆，一份匀浆上清最多可以做约 10 个反应，一般比较充裕。

细胞样本会紧张得多。5×10⁶ 个细胞加入 0.4 mL 提取液超声破碎，按体积计算，理论上最多约 4 个反应。但离心后不能把上清一直吸到底部，实际可用体积会少一些，再考虑移液损耗，安排实验时按 3 个反应估算更稳妥。

如果还要从同一份样本中留一部分做蛋白定量，能用于 LPO 检测的体积会进一步减少。

血清、血浆等液体样本可以直接检测，不需要提取步骤。

因此，如果用的是原代细胞、数量有限的处理组或其他比较珍贵的样本，最好在下单前先把细胞数、样本体积和计划复孔数算清楚。

样本保存方面，新鲜样本最好尽快检测。不能立即检测时，可在 -80℃ 保存 1 个月；室温解冻需在 4 小时内完成。脂质过氧化物本身稳定性有限，从采样到冻存的时间应尽量缩短，冻存也不建议超过 1 个月。

三、检测范围：样本大概会落在哪一段？

试剂盒的检测范围要尽量覆盖样本的实际浓度。范围太窄，可能需要频繁稀释和重测；但下单之前，通常又不知道样本浓度究竟是多少。

比较实用的做法，是先挑 2–3 个预期差异较大的样本，例如对照组和处理组，做一次预实验，看吸光度大致落在哪个区间。

KTB1051 的检测范围为 0.625–80 nmol/mL，灵敏度为 0.625 nmol/mL。产品给出的处理原则是：

• 测定管的 ΔA 小于 0.004 时，可以适当增加样本量；

• 测定管的 ΔA 大于 1.5 时，可以使用对应的 Extraction Buffer 进一步稀释样本，计算结果时再乘以稀释倍数；也可以减少提取时使用的样本量。

不过，0.004 更适合作为调整取样量的提示线。样本是否能可靠定量，还要看读数是否落在当次实验自建标准曲线的范围内。

ΔA 由多个吸光度读数相减得到。信号越低，酶标仪自身波动和孔间差异在最终结果中所占的比例也越大。

按产品提供的典型标准曲线 y = 66.332x − 0.2186 粗略换算，最低标准点 0.625 nmol/mL 对应的 ΔΔA 大约为 0.013。实际实验仍应以自己当天测得的标准曲线为准。

如果样本读数已经低于自建曲线的最低点，就超出了曲线范围。此时更合适的处理是增加样本量或提取量后重新检测，而不是直接拿低于标准曲线范围的数据做组间比较。如果样本经常落在这一段，也可以向技术支持确认更合适的取样量。

高值样本也要提前考虑。KTB1051 给出的做法是稀释样本提取液，而不是稀释已经完成显色的反应液。也就是说，样本一旦超出范围，需要用稀释后的提取液重新配反应体系，再做一次 95℃ 水浴和离心，时间上接近重新跑一遍实验。

这也是为什么正式检测前，最好先用少量差异较大的样本做预实验。

四、通量和耗时：限制速度的往往不是酶标仪

评估通量时，很多人先看 96 孔板能放多少样本。但对于需要长时间加热的比色法，前处理步骤往往才是限制通量的地方。

KTB1051 不是直接在孔板中完成反应。

每个样本需要在 1.5 mL EP 管内加入：

• 100 µL 样本

• 300 µL Reagent I

• 100 µL Working Reagent II

混匀后，在 95℃ 水浴中反应 80 分钟；自然冷却到室温后，再以 8000 g 室温离心 10 分钟，最后取 200 µL 上清转移到 96 孔板中读数。

因此，一批实验能同时跑多少样本，主要取决于水浴锅能放多少管、离心机有多少管位，而不是酶标仪的孔数。

仅水浴和离心就接近两个小时，再加上样本制备、标准品稀释和体系配制，整批实验一般按半天安排更合适。

标准曲线也要占用管位，而且每次实验都需要重新制作。标准品稀释后不稳定，必须在 4 小时内使用。

标准曲线共 8 个浓度点：

80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625 nmol/mL。

此外还要考虑空白管和对照管。

KTB1051 提供 48 T/48 S 和 96 T/96 S 两种规格，各组分还会在规格基础上额外提供 10% 的量，用于制作标准曲线或预实验。

选规格时，不要只按实际样本数计算。更合适的估算方式是：

样本数 × 复孔数 + 标曲 / 对照管 + 预实验。

五、设备清单：下单前先对一遍

比色试剂盒买回来以后才发现设备不匹配，是很常见的问题。KTB1051 可以先按下面这张表检查。

如果实验室使用的是分光光度计而不是酶标仪，也可以检测，但检测试剂的配制量需要按比例调整，建议提前向技术人员确认。

六、试剂配制：难溶、有毒、配好后还有保存期限

KTB1051 中比较需要提前准备的是 Reagent II。

Reagent II 为粉末，需要现用现配：每瓶加入 12 mL 去离子水充分溶解。该试剂较难溶，可以在 70℃ 加热并剧烈振荡，也可以用超声帮助溶解。

如果采用加热助溶，要等溶液冷却到室温后再使用。每次使用前也应检查是否有粉剂重新析出。

配好的 Working Reagent II 在 4℃ 避光条件下可稳定保存 1 个月。

因此，下单前除了看试剂盒规格，还要考虑实验安排：准备一次做完，还是分几批做；如果分批，配好的 Working Reagent II 能不能在 1 个月内用完。

Reagent II 有毒，配制和使用时建议在通风橱内操作。

标准品的操作也需要特别留意。

KTB1051 的 Standard 是 4.05 mmol/mL 的 1,1,3,3-四乙氧基丙烷（TEP）。LPO 试剂盒使用 TEP 作为标准品，是因为 TEP 在酸性加热条件下会水解生成 MDA，而 KTB1051 的显色反应正是 MDA 与 TBA 发生缩合。

标准管和样本管加入相同试剂，并经过相同的加热过程，因此可以用 TEP 配制标准曲线，再根据样本吸光度换算结果。

标准品需要先用无水乙醇稀释至 15 µmol/mL，再逐级稀释。其中第一步只取 2 µL，第二步只取 4 µL。

这两个步骤体积很小，而且稀释剂是无水乙醇。乙醇挥发较快、表面张力低，小体积移液误差会直接传递到后面的整条标准曲线上。

实际操作时，建议使用量程合适的小量程移液器。吸液前可以先用乙醇润洗枪头，吸放动作放慢，出液时把枪头浸入液面下再排出。实验室如果有正向排液（活塞式）移液器，这一步用它更合适。

也可以考虑按比例放大稀释体积，避开 5 µL 以下的移液，但这样会增加 Standard 的消耗量。是否可以这样调整，建议先向技术支持确认。

整个试剂盒需在 4℃ 避光保存，保质期为 6 个月；采用冰袋（蓝冰）运输，到货后应及时放回 4℃ 保存。

七、结果怎么表示：先确定单位，再考虑归一化

同一份样本可以用不同单位报告，最终采用哪一种，通常要看研究设计、课题组习惯以及准备对照的文献。

KTB1051 提供四种结果表示方式：

• 按样本蛋白浓度：nmol/mg prot

• 按样本鲜重：nmol/g

• 按细胞数量：nmol/10⁴ 个细胞

• 按样本体积：nmol/mL，适用于血清等液体样本

不同文献的口径可能不同。如果参考文献习惯按每 10⁶ 个细胞表示，可将 nmol/10⁴ 个细胞的结果乘以 100 进行换算。

如果需要按蛋白浓度归一化，还要额外做蛋白定量。组织样本和细胞样本中比较常见这种处理方式，可以搭配亚科因 BCA蛋白定量试剂盒 KTD3001。

标准曲线建议每次实验自行制作。产品提供的典型标准曲线可以作为参考，但实际计算最好使用当次实验测得的曲线。

官网还提供“在线计算器”工具，路径为“技术中心 > 在线计算器”。样本数量较多时，可以直接输入数据计算结果，减少手工计算步骤。

八、安全与样本边界：高温、有毒试剂和特殊基质都要提前考虑

加热安全

KTB1051 需要在 95℃ 条件下水浴 80 分钟。

这里主要有两个问题：管盖在高温下打开导致液体溅出，以及加热过程中水分蒸发。

每管反应体系只有 500 µL，加热时必须尽量减少水分损失。否则样本和试剂会被浓缩，读数可能偏高；不同管之间蒸发程度不一致，也会增加平行样的差异。

优先使用带螺旋口的 EP 管，并同样缠好封口膜。

使用金属浴时，也可以用重物压紧管盖；带锁扣或盖夹的管子也可以考虑。

如果只有普通扣盖 EP 管，可以先用封口膜缠住管口，再用针头在盖子上扎一个小孔来降低爆盖风险，但这更适合作为备选方案。加热结束后要检查各管液面，体积明显减少的样本建议重新检测。

实验过程中应穿实验服、戴口罩和手套，并在通风橱或生物安全柜内操作。

特殊样本

比色法最终读取的是吸光度，因此样本自身的颜色和浑浊度也可能影响结果。

血清、血浆样本需要留意是否存在溶血或明显脂血。植物组织如果色素含量或含糖量较高，也可能产生额外吸收。

这些属于比色法普遍存在的问题，并不是 KTB1051 特有的限制。

KTB1051 使用 535 nm 和 600 nm 双波长读数。计算时，先分别用测定管减去对照管，再用 535 nm 的差值减去 600 nm 的差值。

按比色法的一般处理思路，较长波长的参比读数通常用于校正浑浊等造成的宽带非特异吸收。不过，如果样本中的色素本身就在 535 nm 附近有明显吸收，参比波长未必能完全消除影响。

因此，有明显颜色的样本建议先做预实验。遇到特殊基质，也可以先向技术支持确认，再决定是否直接做大批量检测。

九、要不要搭配其他氧化应激指标？

脂质过氧化只是氧化应激研究中的一个读数。

实验设计中常见的做法，是从几个层面并行观察，例如活性氧本身的水平（ROS）、抗氧化体系的变化（SOD、CAT、GSH-Px 等酶活性，或总抗氧化能力），以及氧化损伤产物（LPO、MDA 等）。

这些指标能提供不同层面的信息，但它们之间并不是一条固定的因果链。

例如，抗氧化酶活性在不同胁迫强度和不同时间点下，既可能升高，也可能降低。因此，结果需要结合具体实验设计和取样时间来解释。

并行检测时，还要注意各指标的样本前处理方式和样本消耗量不一定相同。样本有限时，最好在实验开始前把各项检测需要的样本量一起算清楚。

是否需要同时做多个指标，应由研究问题和样本条件决定，不需要为了“全面”把所有指标都做一遍。

十、把这些条件套到具体产品上：

把前面的选购条件集中到一起，KTB1051 的主要参数如下。

比较适合的实验： 需要对组织、细胞、血清等多种样本进行 LPO 定量比较；实验室已有能读取 535/600 nm 的酶标仪、95℃ 水浴和通风橱；样本量也能满足每个反应 100 µL 的要求。

不太适合的情况： 如果需要区分具体是哪一种氧化脂质分子，更适合考虑色谱或质谱；如果需要观察活细胞中脂质过氧化的空间分布，更适合采用荧光探针；如果课题一直使用 MDA 作为主要指标，直接选择 MDA 检测试剂盒 KTB1050 会更对应实验目的。

常见问题

LPO 试剂盒和 MDA 试剂盒有什么区别？

两者检测的指标不同。LPO 属于脂质过氧化的上游产物，MDA 是后续降解产物之一。

KTB1051 检测 LPO，方法是让 LPO 在酸性加热条件下转化为 MDA，再与 TBA 缩合显色。如果需要直接检测 MDA，可以选择丙二醛（MDA）检测试剂盒 KTB1050。

具体选哪一个，应以课题使用的指标和对照文献为准。如果需要同时报告两项，也可以并列检测，但方法部分要分别说明检测原理。拿不准时可拨打 400-6800-830 咨询。

为什么 LPO 试剂盒的标准品是 TEP？

TEP（1,1,3,3-四乙氧基丙烷）在酸性加热条件下会水解生成 MDA，而 KTB1051 的显色反应是 MDA 与 TBA 缩合。

标准管和样本管使用相同试剂，并经过相同的加热过程，因此可以用 TEP 配制标准曲线，再根据样本读数进行换算。

血清、血浆样本可以直接测吗？

可以。血清（浆）等液体样本不需要提取，可以直接检测。

细胞样本需要多少个细胞？

按 5×10⁶ 个细胞加入 0.4 mL Extraction Buffer Ⅱ，超声破碎处理。

每个反应使用 100 µL，理论上一份样本最多约能做 4 个反应。考虑离心后的取样余量和移液损耗，实验安排时建议按 3 个反应计算。如果还要做复孔或蛋白定量，需要提前预留足够样本。

标准曲线每次都要做吗？

要。标准品稀释后不稳定，必须在 4 小时内使用，因此每次实验都需要重新检测标准品并制作标准曲线。

整个实验大概要多久？

95℃ 水浴需要 80 分钟，之后还要冷却并离心 10 分钟，再加上样本制备、标准品稀释和反应体系配制，一般可以按半天安排。

结果可以用什么单位表示？

根据样本情况，可以使用 nmol/mg prot、nmol/g、nmol/10⁴ 个细胞或 nmol/mL。官网“在线计算器”可以直接输入数据计算结果。

本文提到的产品仅供科学研究使用，不适用于人类或临床诊断。