小鼠免疫球蛋白同型鉴定ELISA试剂盒-EliKine™

Name: 小鼠免疫球蛋白同型鉴定ELISA试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE3140
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Mouse Ig Isotyping ELISA Kit

产品货号

KTE3140

产品特点：

8 合 1 设计：一次实验即可覆盖小鼠 IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、κ、λ 全部亚型，节省样本与工时。

高特异性：预包被抗体经严格筛选，对目标亚型无交叉反应，背景干扰极低。

即用型组分：包含包被微孔板、阳性对照、HRP 标记检测抗体、TMB 底物及终止液等全套试剂，开盒即可上手。

兼容多种样本：可直接检测杂交瘤细胞培养上清、腹水或纯化抗体，无需额外前处理。

稳定易储：未开封 2–8 °C 避光保存 24 个月，组分独立包装，按需取用。

选择规格

48 T

¥1598

请咨询

96 T

¥2558

请咨询

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 小鼠免疫球蛋白同型鉴定 ELISA 试剂盒 (EliKine™ Mouse Ig Isotyping ELISA Kit, KTE3140) 是一款基于双抗体夹心法的即用型微孔板检测系统，可在单块 96 孔板内一次性完成小鼠 IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 及 κ、λ 轻链共 8 种亚型的定性鉴定，广泛适用于杂交瘤细胞培养上清、腹水及纯化抗体样本。

在单克隆抗体制备流程中，准确区分免疫球蛋白的类别与亚类是筛选优质杂交瘤细胞株、制定下游纯化策略的关键步骤。小鼠免疫球蛋白各亚型在分子量、电荷、对蛋白 A/L 的亲和力、溶解度以及对裂解酶的敏感性等方面存在显著差异。例如，IgG2a 与 IgG2b 可在 pH 7–8 条件下被蛋白 A 高效捕获，而 IgG1 则需 pH 8–9；IgA 与 IgM 更推荐通过凝胶层析或免疫亲和柱进行纯化；κ 链则可利用蛋白 L 实现特异性富集。EliKine™ 小鼠免疫球蛋白同型鉴定 ELISA 试剂盒采用预包被的亚型特异性捕获抗体与 HRP 标记的检测抗体组成“夹心”体系：样本中的目标免疫球蛋白被捕获后，经 TMB 显色，450 nm 处读取吸光度，通过显色与否即可快速判定亚型归属，为克隆筛选与工艺开发提供可靠依据。

应用领域

适用于杂交瘤细胞株筛选、单克隆抗体亚型鉴定、抗体纯化工艺设计、抗体药物开发早期研究以及科研级小鼠免疫球蛋白表征等场景。

产品参数

中文名称	小鼠免疫球蛋白同型鉴定ELISA试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Mouse Ig Isotyping ELISA Kit
产品货号	KTE3140
反应性	小鼠
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	定性测定杂交瘤细胞培养上清液、腹水和纯化抗体中的小鼠免疫球蛋白亚型。
试剂盒组分	•Mouse Ig Isotyping Microplate •Positive Control •Assay Buffer (10×) •HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
分子	IgA/IgM/IgG1/IgG2a/IgG2b/IgG3/κ链/λ链
检测指标	IgA/IgM/IgG1/IgG2a/IgG2b/IgG3/κ链/λ链
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期24个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1：10的比例稀释 Assay Buffer (10×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。1×Assay buffer用于稀释标准品、血清和血浆样品，HRP-conjugated Mouse IL-18 Detect Antibody (100×)。

1×Assay Buffer：

Positive Control: 加入标准品的标签上标注重悬体积的去离子水复溶 Positive Control，将复溶的 Positive Control至少放置 15 min并轻轻晃动，复溶后 Positive Control可在-20℃保存 1个月，重溶使用 1次后丢弃。

Positive Control:

1×HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody： 稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody（100×）进行 1:100稀释。1×HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody应在稀释后 30 min内使用。

1×HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody：

HRP Substrate (TMB)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate (TMB)：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，Wash Buffer (20×)用去离子水进行 1:20 稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

排版设置

按下表所示排版加样。

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	Isotyping
A	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgA
B	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgG1
C	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgG2a
D	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgG2b
E	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgG3
F	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	IgM
G	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	Kappa
H	P	N	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	Lambda

序号123456789101112Isotyping序号123456789101112IsotypingAPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgAAPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgABPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG1BPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG1CPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG2aCPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG2aDPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG2bDPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG2bEPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG3EPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgG3FPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgMFPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10IgMGPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10KappaGPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10KappaHPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10LambdaHPNS1S2S3S4S5S6S7S8S9S10Lambda

注意：P代表阳性对照 Positive Control，N代表阴性对照 Negative Control，S1-S10代表样本 1-10 Sample 1-Sample 10，48 T可检测 4个样本，96 T可检测 10个样本。

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

样本稀释：为了保证实验成功，由于对样本的处理方式，培养条件等不同，建议首次使用本试剂盒前先进行一次预实验以摸索最佳的样本浓度，避免因浓度过高使显色反应超出酶标仪的检测上限或稀释倍数过大低于试剂盒灵敏度。对于样本的稀释，请用 1×Assay Buffer稀释细胞培养上清、腹水和纯化的抗体。

样本稀释：

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
加对照：在酶标板第一列每孔加入100 μL复溶的Positive Control作为阳性对照，在酶标板第二列每孔加入100 μL 1×Assay Buffer作为阴性对照（详见排版设置）。
加样品：每一列的样本孔加入 100 μL经适当稀释的样本（详见样本制备和排版设置）。
加检抗，每孔加入 50 μL 1×HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody，保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
重复步骤 2中的洗涤 6次。
每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min（一般情况下孵育时间在 15 min左右会得到较好的结果，但请根据实验实际情况谨慎选择终止显色的时间）。
每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

加对照：在酶标板第一列每孔加入100 μL复溶的Positive Control作为阳性对照，在酶标板第二列每孔加入100 μL 1×Assay Buffer作为阴性对照（详见排版设置）。

加样品：每一列的样本孔加入 100 μL经适当稀释的样本（详见样本制备和排版设置）。

加检抗，每孔加入 50 μL 1×HRP-conjugated Mouse Ig Isotyping Detect Antibody，保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

重复步骤 2中的洗涤 6次。

每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min（一般情况下孵育时间在 15 min左右会得到较好的结果，但请根据实验实际情况谨慎选择终止显色的时间）。

每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

注意事项

如果 Assay Buffer (10×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。
不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
为确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附板贴。
Stop Solution有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。

如果 Assay Buffer (10×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。

不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。

勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。

为确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附板贴。

Stop Solution有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。

免责声明

本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。