皮质醇竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 皮质醇竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE3059
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Cortisol Competitive ELISA Kit

产品货号

KTE3059

产品特点：

竞争法设计，检测范围0.117-15 ng/mL，灵敏度低至0.117 ng/mL，满足低丰度样本需求

跨物种兼容：人、小鼠、大鼠通用，无需更换抗体

预包被高亲和力酶标板，缩短实验时间，提升批间一致性

组分齐全：包含冻干标准品、100×浓缩抗体与HRP偶联物、即用型TMB底物等，即拆即用

严格验证：对结构类似物无显著交叉反应，背景干扰极低

选择规格

48 T

¥1598

期货（5天内发货）

96 T

¥2558

期货（5天内发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ Cortisol Competitive ELISA Kit（货号：KTE3059）是一款基于竞争抑制原理的高灵敏度ELISA试剂盒，专为定量检测人、小鼠、大鼠样本中的皮质醇而设计，适用于细胞培养上清、血清及血浆等多种基质。

背景知识

皮质醇（Cortisol）是由肾上腺皮质束状带合成的糖皮质激素，在应激、低血糖等刺激下释放，是公认的“压力激素”。其分泌受ACTH昼夜节律调控，清晨达峰后逐渐下降。血清中90-95 %的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（CBG）及白蛋白结合，仅少量以游离形式发挥生理作用。在代谢层面，皮质醇促进糖异生、肝糖原沉积并抑制外周葡萄糖利用；在免疫层面，它通过抑制炎症因子表达发挥强效抗炎作用。异常水平与库欣综合征、抑郁症、前列腺癌等疾病密切相关。EliKine™试剂盒利用固相兔抗小鼠抗体捕获皮质醇特异性单克隆抗体，随后引入HRP标记皮质醇与样本/标准品竞争结合有限抗体位点，显色强度与皮质醇浓度呈反比，实现精准定量。

应用领域

适用于神经内分泌研究、应激反应机制探索、代谢综合征模型评估及抗炎药物药效学分析，可处理细胞上清、血清、血浆等常规样本，为皮质醇相关疾病诊断与基础研究提供可靠数据支持。

产品参数

中文名称	皮质醇竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Cortisol Competitive ELISA Kit
产品货号	KTE3059
反应性	人/小鼠/大鼠
检测类型	ELISA
检测方法	竞争法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆
试剂盒组分	•Cortisol Microplate •Cortisol Antibody (100×) •Cortisol Standard (lyophilized) •Standard Diluent •Assay Buffer (10×) •Dissociation Reagent •HRP Conjugated Cortisol (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
检测范围	0.117 ng/mL-15 ng/mL
灵敏度	0.117 ng/mL
分子	Cortisol
检测指标	Cortisol
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期24个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

Standard Diluent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Standard Diluent用于稀释标准品。

Standard Diluent：

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:10的比例稀释 Assay Buffer (10×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30 天。1×Assay buffer 用于稀释标准品、血清和血浆样品，Cortisol Antibody (50×)、Biotin Conjugated Cortisol (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

1×Assay Buffer：

1×Cortisol Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Cortisol Antibody（100×）进行 1:100稀释。1×Cortisol Antibody应在稀释后 30 min内使用。

1×Cortisol Antibody：

Cortisol Standard: 加入标准品的标签上标注重悬体积的无菌水复溶 Cortisol Standard得到 30 ng/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动，复溶后 Standard可在-20℃保存 1个月，重溶使用 1次后丢弃。

Cortisol Standard:

Dissociation Reagent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Dissociation Reagent用于去除血清样本潜在的干扰蛋白和皮质醇结合蛋白。

Dissociation Reagent：

1×HRP Conjugated Cortisol：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Biotin Conjugated Cortisol (100×)进行 1:100稀释。1×Biotin Conjugated Cortisol应在稀释后 30 min内使用。

1×HRP Conjugated Cortisol：

HRP Substrate（TMB）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate（TMB）：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 Standard Diluent将 30 ng/mL标准品稀释为 15、7.5、3.75、1.88、0.938、0.469、0.234和 0.117 ng/mL的 Cortisol标准品。

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	230 μL of 30 ng/mL	230	15
Std.2	230 μL of Std.1 (15 ng/mL)	230	7.5
Std.3	230 μL of Std.2 (7.5 ng/mL)	230	3.75
Std.4	230 μL of Std.3 (3.75 ng/mL)	230	1.88
Std.5	230 μL of Std.4 (1.88 ng/mL)	230	0.938
Std.6	230 μL of Std.5 (0.938 ng/mL)	230	0.469
Std.7	230 μL of Std.6 (0.469 ng/mL)	230	0.234
Std.8	230 μL of Std.7 (0.234 ng/mL)	230	0.117

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	230 μL of 30 ng/mL	230	15
Std.2	230 μL of Std.1 (15 ng/mL)	230	7.5
Std.3	230 μL of Std.2 (7.5 ng/mL)	230	3.75
Std.4	230 μL of Std.3 (3.75 ng/mL)	230	1.88
Std.5	230 μL of Std.4 (1.88 ng/mL)	230	0.938
Std.6	230 μL of Std.5 (0.938 ng/mL)	230	0.469
Std.7	230 μL of Std.6 (0.469 ng/mL)	230	0.234
Std.8	230 μL of Std.7 (0.234 ng/mL)	230	0.117

序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）Std.1230 μL of 30 ng/mL23015Std.2230 μL of Std.1 (15 ng/mL)2307.5Std.3230 μL of Std.2 (7.5 ng/mL)2303.75Std.4230 μL of Std.3 (3.75 ng/mL)2301.88Std.5230 μL of Std.4 (1.88 ng/mL)2300.938Std.6230 μL of Std.5 (0.938 ng/mL)2300.469Std.7230 μL of Std.6 (0.469 ng/mL)2300.234Std.8230 μL of Std.7 (0.234 ng/mL)2300.117Std.1230 μL of 30 ng/mL23015Std.1230 μL of 30 ng/mL23015Std.2230 μL of Std.1 (15 ng/mL)2307.5Std.2230 μL of Std.1 (15 ng/mL)2307.5Std.3230 μL of Std.2 (7.5 ng/mL)2303.75Std.3230 μL of Std.2 (7.5 ng/mL)2303.75Std.4230 μL of Std.3 (3.75 ng/mL)2301.88Std.4230 μL of Std.3 (3.75 ng/mL)2301.88Std.5230 μL of Std.4 (1.88 ng/mL)2300.938Std.5230 μL of Std.4 (1.88 ng/mL)2300.938Std.6230 μL of Std.5 (0.938 ng/mL)2300.469Std.6230 μL of Std.5 (0.938 ng/mL)2300.469Std.7230 μL of Std.6 (0.469 ng/mL)2300.234Std.7230 μL of Std.6 (0.469 ng/mL)2300.234Std.8230 μL of Std.7 (0.234 ng/mL)2300.117Std.8230 μL of Std.7 (0.234 ng/mL)2300.117

注意：每次实验都需要新配制标准品。

注意：

反应板设置

每块板或每批酶标条都须至少包含 2个空白孔、 2非特异结合孔（NSB）、2 个最大结合孔（B0）以及 2条包含 8个点的标准曲线。

注意：为了确保准确、可重复的结果，每次检测都须包含以上设置。每个样本应做两个梯度的稀释，每个梯度做 2次重复。为了统计的目的，我们建议每个样本做 3次重复。推荐的反应板设置和加样汇总如下所示。实验者可根据具体实验，更改孔的位置和类型。

注意：

孔类型	Standard Diluent (μL)	1×Cortisol Antibody (μL)	标准品 (μL)	样本 (μL)	1×HRP Conjugated Cortisol (μL)
空白孔	—	—	—	—	—
非特异结合孔（NSB）	100	—	—	—	50
最大结合孔（B0）	100	50	—	—	50
偶联物总酶活孔（TA）	—	—	—	—	5（加 TMB 前）
标准品孔	—	50	100	—	50
样本孔	—	50	—	100	50

孔类型	Standard Diluent (μL)	1×Cortisol Antibody (μL)	标准品 (μL)	样本 (μL)	1×HRP Conjugated Cortisol (μL)
空白孔	—	—	—	—	—
非特异结合孔（NSB）	100	—	—	—	50
最大结合孔（B0）	100	50	—	—	50
偶联物总酶活孔（TA）	—	—	—	—	5（加 TMB 前）
标准品孔	—	50	100	—	50
样本孔	—	50	—	100	50

孔类型Standard Diluent (μL)1×Cortisol Antibody (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×HRP Conjugated Cortisol (μL)孔类型Standard Diluent (μL)1×Cortisol Antibody (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×HRP Conjugated Cortisol (μL)孔类型Standard Diluent (μL)1×Cortisol Antibody (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×HRP Conjugated Cortisol (μL)空白孔—————非特异结合孔（NSB）100———50最大结合孔（B0）10050——50偶联物总酶活孔（TA）————5（加 TMB 前）标准品孔—50100—50样本孔—50—10050空白孔—————空白孔—————非特异结合孔（NSB）100———50非特异结合孔（NSB）100———50最大结合孔（B0）10050——50最大结合孔（B0）10050——50偶联物总酶活孔（TA）————5（加 TMB 前）偶联物总酶活孔（TA）————5（加 TMB 前）标准品孔—50100—50标准品孔—50100—50样本孔—50—10050样本孔—50—10050

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血清：

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血浆：

对于血清样本，需要预处理去除潜在的干扰蛋白和皮质醇结合蛋白。

在离心管中加入 100 μL血清和 100 μL Dissociation Reagent，混匀。
室温孵育 15 min，12,000×g以上转速离心 4 min。
小心吸取 50 μL上清至一新的离心管，加入 950 μL 1×Assay Buffer，混匀。

在离心管中加入 100 μL血清和 100 μL Dissociation Reagent，混匀。

室温孵育 15 min，12,000×g以上转速离心 4 min。

小心吸取 50 μL上清至一新的离心管，加入 950 μL 1×Assay Buffer，混匀。

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

注意：

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
加抗体：除了空白孔、 NSB和 TA孔，其余每孔加入 50 μL1×Cortisol Antibody。给酶标板覆膜，室温孵育 1.5 h。
洗涤：重复步骤 2中的洗涤 6次。
加样：标准品孔中加入 100 μL系列稀释的标准品。样本孔中加入 100 μL预稀释样本。NSB孔加 100 μL Standard Diluent，B0孔加入 100 μL Standard Diluent。(参考"试剂准备"中"反应板设置" )。
加偶联竞争物：除了 Blank和 TA孔，其余每孔加入 50 μL1×HRP Conjugated Cortisol。保证步骤 5、6连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
重复步骤 2中的洗涤 6次。
TA 孔加 5 μL 1×HRP Conjugated Cortisol。
每孔加入 100 μL HRP Substrate（TMB）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。
每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

加抗体：除了空白孔、 NSB和 TA孔，其余每孔加入 50 μL1×Cortisol Antibody。给酶标板覆膜，室温孵育 1.5 h。

洗涤：重复步骤 2中的洗涤 6次。

加样：标准品孔中加入 100 μL系列稀释的标准品。样本孔中加入 100 μL预稀释样本。NSB孔加 100 μL Standard Diluent，B0孔加入 100 μL Standard Diluent。(参考"试剂准备"中"反应板设置" )。

加偶联竞争物：除了 Blank和 TA孔，其余每孔加入 50 μL1×HRP Conjugated Cortisol。保证步骤 5、6连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

重复步骤 2中的洗涤 6次。

TA 孔加 5 μL 1×HRP Conjugated Cortisol。

每孔加入 100 μL HRP Substrate（TMB）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。

每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

注意：5-30 min显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间。

注意：

肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；
仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5-0.7、S5孔的 OD值达到 0.05-0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；

仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5-0.7、S5孔的 OD值达到 0.05-0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

结果计算

计算标准品和样本的平均 OD值，然后减去 NSB的 OD值，标准品和样本的校准 OD值除以 B0的校准 OD值，乘以 100，计算得到% B/B0。
标准曲线的绘制：将标曲中 Std.1 -Std.8的% B/B0作为纵坐标，标准品 Cortisol浓度取对数后作为横坐标。选择最佳的曲线(如四参数)进行拟合。根据标准曲线，计算得到 Cortisol的浓度。

计算标准品和样本的平均 OD值，然后减去 NSB的 OD值，标准品和样本的校准 OD值除以 B0的校准 OD值，乘以 100，计算得到% B/B0。

标准曲线的绘制：将标曲中 Std.1 -Std.8的% B/B0作为纵坐标，标准品 Cortisol浓度取对数后作为横坐标。选择最佳的曲线(如四参数)进行拟合。根据标准曲线，计算得到 Cortisol的浓度。

注意：标曲的计算不需要用到Blank和TA孔的OD值。它们是作为反应体系的诊断工具。标准曲线最高浓度点的终浓度为 30 ng/mL。如果血清样本按照说明书进行了稀释，最终的稀释倍数为 40。如果样本进行了其它方式的稀释，计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

注意：

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。