大鼠胰岛素ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 大鼠胰岛素ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE3040
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Rat Insulin Competitive ELISA Kit

产品货号

KTE3040

产品特点：

竞争法设计，灵敏度低至0.16 ng/mL，线性范围0.16–20 ng/mL

高特异性：对胰岛素类似物无明显交叉反应，背景干扰极低

兼容细胞培养上清、血清、血浆等多种大鼠样本，实验流程标准化

预包被高亲和力酶标板，减少批间差异，提升重复性

完整组分：含标准品、检测抗体、Streptavidin-HRP、TMB底物及终止液，开盒即可实验

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

期货（5天内发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 大鼠胰岛素ELISA定量试剂盒 (EliKine™ Rat Insulin Competitive ELISA Kit)是一款基于竞争法原理的高灵敏度酶联免疫检测工具，专为定量测定大鼠细胞培养上清、血清及血浆样本中的胰岛素含量而设计。

胰岛素是由胰岛β细胞分泌的多肽激素，在糖、脂、蛋白质代谢中扮演核心角色：它促使脂肪、肝脏及骨骼肌细胞摄取血液中的葡萄糖并转化为糖原或甘油三酯；同时抑制肝脏葡萄糖输出。当β细胞因自身免疫被破坏（1型糖尿病）或出现胰岛素抵抗（2型糖尿病）时，胰岛素水平异常；胰岛素瘤则表现为胰岛素过量。EliKine™ 大鼠胰岛素ELISA定量试剂盒采用竞争抑制酶免疫分析：预包被的抗大鼠胰岛素抗体与样本或生物素化胰岛素竞争结合；随后以链霉亲和素-HRP放大信号，TMB显色。颜色深浅与样本胰岛素浓度呈反比，实现0.16–20 ng/mL范围内的精确定量。

应用领域

本试剂盒适用于基础代谢研究、糖尿病及胰岛素抵抗模型药效评价、胰岛β细胞功能分析以及大鼠源生物制品质量控制等场景，为科研工作者提供可靠的胰岛素定量数据支持。

产品参数

中文名称	大鼠胰岛素ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Rat Insulin Competitive ELISA Kit
产品货号	KTE3040
反应性	大鼠
检测类型	ELISA
检测方法	竞争法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆
试剂盒组分	•Rat Insulin Microplate •Rat Insulin Standard (lyophilized) •Standard Diluent •Assay Buffer (10×) •Rat Insulin Detect Antibody (100×) •Streptavidin-HRP (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
检测范围	0.16 ng/mL-20 ng/mL
灵敏度	0.16 ng/mL
分子	Insulin
检测指标	Insulin
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期24个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

Standard Diluent

即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Standard Diluent用于稀释标准品。

1×Assay Buffer

使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:10的比例稀释 Assay Buffer (10×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30 天。1×Assay buffer 用于稀释血清和血浆样品、Biotin Conjugated Rat Insulin (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

Rat Insulin Standard

加入标准品的标签上标注重悬体积的无菌水复溶 Rat Insulin Standard得到 40 ng/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动，复溶后 Standard可在-20℃保存 1个月，重溶使用 1次后丢弃。

1×Biotin Conjugated Rat Insulin

稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Biotin Conjugated Rat Insulin (100×)进行 1:100稀释。1×Biotin Conjugated Rat Insulin应在稀释后 30 min内使用。

1×Streptavidin-HRP

稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Streptavidin-HRP (100×)进行 1:100稀释。1×Streptavidin-HRP应在 30 min内使用。

HRP Substrate (TMB)

即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

Stop Solution

即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

1×Wash Buffer

使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

标准曲线设置

按下表所示，用 Standard Diluent将 40 ng/mL标准品稀释为 20、10、5、2.5、 1.25、0.63、0.31和 0.16 ng/mL的 Rat Insulin标准品。

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	230 μL of 40 ng/mL	230	20
Std.2	230 μL of Std.1 (20 ng/mL)	230	10
Std.3	230 μL of Std.2 (10 ng/mL)	230	5
Std.4	230 μL of Std.3 (5 ng/mL)	230	2.5
Std.5	230 μL of Std.4 (2.5 ng/mL)	230	1.25
Std.6	230 μL of Std.5 (1.25 ng/mL)	230	0.63
Std.7	230 μL of Std.6 (0.63 ng/mL)	230	0.31
Std.8	230 μL of Std.7 (0.31 ng/mL)	230	0.16

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	230 μL of 40 ng/mL	230	20
Std.2	230 μL of Std.1 (20 ng/mL)	230	10
Std.3	230 μL of Std.2 (10 ng/mL)	230	5
Std.4	230 μL of Std.3 (5 ng/mL)	230	2.5
Std.5	230 μL of Std.4 (2.5 ng/mL)	230	1.25
Std.6	230 μL of Std.5 (1.25 ng/mL)	230	0.63
Std.7	230 μL of Std.6 (0.63 ng/mL)	230	0.31
Std.8	230 μL of Std.7 (0.31 ng/mL)	230	0.16

序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）Std.1230 μL of 40 ng/mL23020Std.2230 μL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.3230 μL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.4230 μL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.5230 μL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.6230 μL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.7230 μL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.8230 μL of Std.7 (0.31 ng/mL)2300.16Std.1230 μL of 40 ng/mL23020Std.1230 μL of 40 ng/mL23020Std.2230 μL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.2230 μL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.3230 μL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.3230 μL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.4230 μL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.4230 μL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.5230 μL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.5230 μL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.6230 μL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.6230 μL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.7230 μL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.7230 μL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.8230 μL of Std.7 (0.31 ng/mL)2300.16Std.8230 μL of Std.7 (0.31 ng/mL)2300.16

注意：每次实验都需要新配制标准品。

反应板设置

每块板或每批酶标条都须至少包含 2个空白孔、 2非特异结合孔（NSB）、2 个最大结合孔（B0）以及 2条包含 8个点的标准曲线。

注意：为了确保准确、可重复的结果，每次检测都须包含以上设置。每个样本应做两个梯度的稀释，每个梯度做 2次重复。为了统计的目的，我们建议每个样本做 3次重复。推荐的反应板设置和加样汇总如下所示。实验者可根据具体实验，更改孔的位置和类型。

Standard Diluent (μL)	1×Assay Buffer (μL)	标准品 (μL)	样本 (μL)	1×Biotin Conjugated Rat Insulin (μL)	1×Streptavidin-HRP (μL)
—	—	—	—	—	—
100	50	—	—	—	100
100	—	—	—	50	100
—	—	—	—	—	10（加 TMB 前）
—	—	100	—	50	100
—	—	100	50	100	100

Standard Diluent (μL)	1×Assay Buffer (μL)	标准品 (μL)	样本 (μL)	1×Biotin Conjugated Rat Insulin (μL)	1×Streptavidin-HRP (μL)
—	—	—	—	—	—
100	50	—	—	—	100
100	—	—	—	50	100
—	—	—	—	—	10（加 TMB 前）
—	—	100	—	50	100
—	—	100	50	100	100

Standard Diluent (μL)1×Assay Buffer (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×Biotin Conjugated Rat Insulin (μL)1×Streptavidin-HRP (μL)Standard Diluent (μL)1×Assay Buffer (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×Biotin Conjugated Rat Insulin (μL)1×Streptavidin-HRP (μL)Standard Diluent (μL)1×Assay Buffer (μL)标准品 (μL)样本 (μL)1×Biotin Conjugated Rat Insulin (μL)1×Streptavidin-HRP (μL)——————10050———100100———50100—————10（加 TMB 前）——100—50100——10050100100————————————10050———10010050———100100———50100100———50100—————10（加 TMB 前）—————10（加 TMB 前）——100—50100——100—50100——10050100100——10050100100

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
标准品：除了 Blank和 TA孔，标准品孔中加入 100 μL系列稀释的标准品。NSB孔加 100 μL Standard Diluent，B0孔加入 100 μL Standard Diluent。(参考"试剂准备"中"反应板设置" )。
加样本：血清/血浆：样本孔中加入 80 μL 1×Assay Buffer和 20 μL预稀释样本；细胞培养上清：样本孔加入 100 μL细胞培养上清（详见样本制备）。
加偶联竞争物：除了 Blank和 TA孔，NSB 孔加入 50 μL 1×Assay Buffer，其余每孔加入 50 μL1×Biotin Conjugated Rat Insulin。保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1.5 h。
重复步骤 2中的洗涤 6次。
除了 Blank和 TA孔每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。
重复步骤 2中的洗涤 6次。
TA 孔加 10 μL 1×Streptavidin-HRP。
每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。
每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

标准品：除了 Blank和 TA孔，标准品孔中加入 100 μL系列稀释的标准品。NSB孔加 100 μL Standard Diluent，B0孔加入 100 μL Standard Diluent。(参考"试剂准备"中"反应板设置" )。

加样本：血清/血浆：样本孔中加入 80 μL 1×Assay Buffer和 20 μL预稀释样本；细胞培养上清：样本孔加入 100 μL细胞培养上清（详见样本制备）。

加偶联竞争物：除了 Blank和 TA孔，NSB 孔加入 50 μL 1×Assay Buffer，其余每孔加入 50 μL1×Biotin Conjugated Rat Insulin。保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1.5 h。

重复步骤 2中的洗涤 6次。

除了 Blank和 TA孔每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。

重复步骤 2中的洗涤 6次。

TA 孔加 10 μL 1×Streptavidin-HRP。

每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。

每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

注意：5-30 min显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间。

肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；
仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5-0.7、S5孔的 OD值达到 0.05-0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；

仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5-0.7、S5孔的 OD值达到 0.05-0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

结果计算

计算标准品和样本的平均 OD值，然后减去 NSB的 OD值，标准品和样本的校准 OD值除以 B0的校准 OD值，乘以 100，计算得到% B/B0。
标准曲线的绘制：将标曲中 Std.1 -Std.8的% B/B0作为纵坐标，标准品 Rat Insulin浓度取对数后作为横坐标。选择最佳的曲线(如四参数)进行拟合。根据标准曲线，计算得到 Rat Insulin的浓度。

计算标准品和样本的平均 OD值，然后减去 NSB的 OD值，标准品和样本的校准 OD值除以 B0的校准 OD值，乘以 100，计算得到% B/B0。

标准曲线的绘制：将标曲中 Std.1 -Std.8的% B/B0作为纵坐标，标准品 Rat Insulin浓度取对数后作为横坐标。选择最佳的曲线(如四参数)进行拟合。根据标准曲线，计算得到 Rat Insulin的浓度。

注意：标曲的计算不需要用到Blank和TA孔的OD值。它们是作为反应体系的诊断工具。标准曲线最高浓度点的终浓度为 20 ng/mL。如果样本进行了其它方式的稀释，计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。