小鼠颗粒酶B ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 小鼠颗粒酶B ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE3018
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Mouse Granzyme B ELISA Kit

产品货号

KTE3018

产品特点：

采用双抗体夹心法，确保检测特异性，对Granzyme B类似物无交叉反应

检测范围0.31-20 ng/mL，灵敏度达0.31 ng/mL，满足低丰度样本检测需求

兼容细胞培养上清、血清、血浆等多种样本类型，实验设计更灵活

预包被96孔板设计，减少操作步骤，提升检测效率

配套完整试剂组分（含标准品、检测抗体、HRP底物等），即开即用

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™小鼠颗粒酶B ELISA定量试剂盒（EliKine™ Mouse Granzyme B ELISA Kit，货号：KTE3018）是一款基于双抗体夹心法原理的ELISA试剂盒，专为定量检测小鼠来源的细胞培养上清、血清及血浆样本中的颗粒酶B（Granzyme B）而设计，可广泛应用于免疫学、肿瘤学及炎症研究中的细胞毒性分析。

背景知识

颗粒酶B（Granzyme B）是一种丝氨酸蛋白酶，主要储存在细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）和自然杀伤（NK）细胞的颗粒中。当这些免疫细胞识别靶细胞后，会释放颗粒酶B与穿孔素协同作用，诱导靶细胞凋亡。近年来研究发现，非细胞毒性细胞（如嗜碱性粒细胞、肥大细胞和平滑肌细胞）也能分泌Granzyme B，参与炎症反应和细胞外基质重塑。异常升高的Granzyme B水平与自身免疫病、皮肤病及1型糖尿病等疾病密切相关。本试剂盒通过特异性抗体捕获样本中的Granzyme B，经生物素-链霉亲和素系统放大信号，最终以TMB显色反应实现精准定量。

应用领域

适用于免疫学研究中的CTL/NK细胞杀伤功能评估、肿瘤微环境中细胞毒性分析、自身免疫病发病机制探索，以及药物开发中免疫调节剂的体外筛选等场景。

产品参数

中文名称	小鼠颗粒酶B ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Mouse Granzyme B ELISA Kit
产品货号	KTE3018
反应性	小鼠
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆
试剂盒组分	•Mouse Granzyme B Microplate •Mouse Granzyme B Standard (lyophilized) •Assay Buffer (10×) •Mouse Granzyme B Detect Antibody (100×) •Streptavidin-HRP (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
检测范围	0.31 ng/mL-20 ng/mL
灵敏度	0.31 ng/mL
分子	Granzyme B
检测指标	Granzyme B
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期24个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:10的比例稀释 Assay Buffer (10×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。1×Assay buffer用于稀释标准品、血清和血浆样品，Mouse Granzyme B Detect Antibody (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

1×Assay Buffer：

Mouse CCL13 Standard: 加入标准品的标签上标注重悬体积的去离子水复溶 Mouse Granzyme B Standard得到 40 ng/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动，复溶后 Standard可在-20℃保存 1个月，重溶使用 1次后丢弃。

Mouse CCL13 Standard:

1×Mouse CCL13 Detect Antibody： 稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Mouse CCL13 Detect Antibody（100×）进行 1:100 稀释。1×Mouse Granzyme B Detect Antibody应在稀释后 30 min内使用。

1×Mouse CCL13 Detect Antibody：

1×Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Streptavidin-HRP（100×）进行 1:100稀释。1×Streptavidin-HRP应在 30 min内使用。

1×Streptavidin-HRP：

HRP Substrate (TMB)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate (TMB)：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 1×Assay buffer将 4,000 ng/mL标准品稀释为 20、10、5、 2.5、1.25、0.63、0.31和 0 ng/mL 的 Mouse Granzyme B标准品。

序号	标准品体积	1×Assay buffer体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	230 µL of 4,000 ng/mL	230	20
Std.2	230 µL of Std.1 (20 ng/mL)	230	10
Std.3	230 µL of Std.2 (10 ng/mL)	230	5
Std.4	230 µL of Std.3 (5 ng/mL)	230	2.5
Std.5	230 µL of Std.4 (2.5 ng/mL)	230	1.25
Std.6	230 µL of Std.5 (1.25 ng/mL)	230	0.63
Std.7	230 µL of Std.6 (0.63 ng/mL)	230	0.31
Std.8	0	230	0

序号标准品体积1×Assay buffer体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积1×Assay buffer体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积1×Assay buffer体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）Std.1230 µL of 4,000 ng/mL23020Std.2230 µL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.3230 µL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.4230 µL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.5230 µL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.6230 µL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.7230 µL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.802300Std.1230 µL of 4,000 ng/mL23020Std.1230 µL of 4,000 ng/mL23020Std.2230 µL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.2230 µL of Std.1 (20 ng/mL)23010Std.3230 µL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.3230 µL of Std.2 (10 ng/mL)2305Std.4230 µL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.4230 µL of Std.3 (5 ng/mL)2302.5Std.5230 µL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.5230 µL of Std.4 (2.5 ng/mL)2301.25Std.6230 µL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.6230 µL of Std.5 (1.25 ng/mL)2300.63Std.7230 µL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.7230 µL of Std.6 (0.63 ng/mL)2300.31Std.802300Std.802300

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

1. 细胞培养上清：

2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

2. 血清：

3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

3. 血浆：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

2. 除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

3. 加标准品：标准品孔加入 100 μL稀释的标准品。

4. 加样品：血清/血浆：样本孔加入 90 μL 1×Assay Buffer和 10 μL预稀释样本；细胞培养上清：样本孔加入 100 μL细胞培养上清（详见样本制备）。

5. 加检抗：每孔加入 50 μL 1×Mouse Granzyme B Detect Antibody，保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

6. 重复步骤 2中的洗涤 6次。

7. 每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 45 min，注意避光。

8. 按照步骤 3重复洗涤过程 6次。

9. 每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。

10. 每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

10.

11. 在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

11.

注意：5-30 min显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间：

1) 肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；
2) 仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5 - 0.7、S5孔的 OD值达到 0.05 - 0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

1) 肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；

2) 仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5 - 0.7、S5孔的 OD值达到 0.05 - 0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD值。

2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。