人/小鼠转化生长因子β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 人/小鼠转化生长因子β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE3008
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human/Mouse TGF-β1 ELISA Kit

产品货号

KTE3008

产品特点：

双抗体夹心法，灵敏度高至31.25 pg/mL，线性范围宽

人/小鼠双物种反应性，一份试剂盒满足跨物种研究需求

预包被板、冻干标准品、即用型缓冲液等完整组分，实验流程简洁

对TGF-β家族其他成员无明显交叉反应，背景干扰低

支持细胞培养上清、血清、血浆等多种样本类型

选择规格

48 T

¥1598

期货（5天内发货）

96 T

¥2558

期货（5天内发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 人/小鼠转化生长因子β1 ELISA定量试剂盒是一款基于经典双抗体夹心法的固相酶联免疫吸附检测工具，可在细胞培养上清、血清、血浆等多种生物液体中，对人源与小鼠源TGF-β1进行31.25–2,000 pg/mL范围内的准确定量。

背景与原理

转化生长因子β1（TGF-β1）是TGF-β超家族的核心成员，广泛参与细胞生长、增殖、分化、凋亡及免疫调节等关键生理过程。TGF-β1信号通路的异常与癌症、自身免疫疾病、肝肾病变、糖尿病、心血管疾病及呼吸系统疾病等多种病理状态密切相关。EliKine™ 试剂盒采用预包被特异性捕获抗体的96孔板，样品中的TGF-β1首先被固相抗体捕获；随后加入生物素化检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”夹心复合物；再经链霉亲和素-HRP放大信号，最后以TMB显色并在450 nm读取吸光度，吸光度与TGF-β1浓度呈正比，实现高灵敏、高特异的定量。

应用领域

适用于肿瘤微环境研究、免疫调控机制探索、纤维化疾病模型、炎症反应监测、药物筛选与药效评价等方向，为基础科研及临床前研究提供可靠的TGF-β1定量数据。

产品参数

中文名称	人/小鼠转化生长因子β1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human/Mouse TGF-β1 ELISA Kit
产品货号	KTE3008
反应性	人/小鼠
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆
试剂盒组分	•TGF-β1 Microplate •TGF-β1 Standard (lyophilized) •Standard Diluent •Assay Buffer (10×) •TGF-β1 Detect Antibody (100×) •Streptavidin-HRP (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
检测范围	31.25 pg/mL-2,000 pg/mL
灵敏度	31.25 pg/mL
分子	TGF-β1
检测指标	TGF-β1
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期24个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
盐酸、氢氧化钠
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

盐酸、氢氧化钠

去离子水

试剂准备

Standard Diluent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Standard Diluent用于稀释标准品。

Standard Diluent：

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:10的比例稀释 Assay Buffer (10×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30 天。1×Assay buffer 用于稀释血清和血浆样品，TGF-β1 Detect Antibody (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

1×Assay Buffer：

TGF-β1 Standard: 加入标准品的标签上标注重悬体积的去离子水复溶 TGF-β1 Standard得到 4,000 pg/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动，复溶后 Standard可在-20℃保存 1个月，重溶使用 1次后丢弃。

TGF-β1 Standard:

1×TGF-β1 Detect Antibody： 稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 TGF-β1 Detect Antibody（100×）进行 1:100 稀释。1×TGF-β1 Detect Antibody应在稀释后 30 min内使用。

1×TGF-β1 Detect Antibody：

1×Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Streptavidin-HRP（100×）进行 1:100稀释。1×Streptavidin-HRP应在 30 min内使用。

1×Streptavidin-HRP：

HRP Substrate (TMB)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate (TMB)：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 Standard Diluent将 4,000 pg/mL标准品稀释为 2,000、1,000、500、 250、125、62.5、31.25和 0 pg/mL 的 TGF-β1标准品。

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	230 μL of 4,000 pg/mL	230	2,000
Std.2	230 μL of Std.1 (2,000 pg/mL)	230	1,000
Std.3	230 μL of Std.2 (1,000 pg/mL)	230	500
Std.4	230 μL of Std.3 (500 pg/mL)	230	250
Std.5	230 μL of Std.4 (250 pg/mL)	230	125
Std.6	230 μL of Std.5 (125 pg/mL)	230	62.5
Std.7	230 μL of Std.6 (62.5 pg/mL)	230	31.25
Std.8	0	230	0

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	230 μL of 4,000 pg/mL	230	2,000
Std.2	230 μL of Std.1 (2,000 pg/mL)	230	1,000
Std.3	230 μL of Std.2 (1,000 pg/mL)	230	500
Std.4	230 μL of Std.3 (500 pg/mL)	230	250
Std.5	230 μL of Std.4 (250 pg/mL)	230	125
Std.6	230 μL of Std.5 (125 pg/mL)	230	62.5
Std.7	230 μL of Std.6 (62.5 pg/mL)	230	31.25
Std.8	0	230	0

序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）Std.1230 μL of 4,000 pg/mL2302,000Std.1230 μL of 4,000 pg/mL2302,000Std.2230 μL of Std.1 (2,000 pg/mL)2301,000Std.2230 μL of Std.1 (2,000 pg/mL)2301,000Std.3230 μL of Std.2 (1,000 pg/mL)230500Std.3230 μL of Std.2 (1,000 pg/mL)230500Std.4230 μL of Std.3 (500 pg/mL)230250Std.4230 μL of Std.3 (500 pg/mL)230250Std.5230 μL of Std.4 (250 pg/mL)230125Std.5230 μL of Std.4 (250 pg/mL)230125Std.6230 μL of Std.5 (125 pg/mL)23062.5Std.6230 μL of Std.5 (125 pg/mL)23062.5Std.7230 μL of Std.6 (62.5 pg/mL)23031.25Std.7230 μL of Std.6 (62.5 pg/mL)23031.25Std.802300Std.802300

注意：每次实验都需要新配制标准品。

注意：

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。培养液中的动物血清可能含有高水平的 TGF-β1前体，因此需要通过对照来确定培养液中 TGF-β1的背景浓度。

1. 细胞培养上清：

2. 尿液：无菌收集晨尿中段，1,000 g 离心 10 min除杂立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

2. 尿液：

3. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

3. 血清：

4. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

4. 血浆：

样本活化

生物样品中的 TGF-β1通常以无活性的形式存在，在检测 TGF-β1活性前样本必须用酸活化碱中和处理（标准品除外），具体活化步骤如下。

1. 细胞培养上清、尿液样本：每 100 μL样本加入 20 μL 1N HCl，混匀，室温孵育 10min，然后加入 20 μL 1N NaOH进行中和。混合均匀后须立即检测。

1. 细胞培养上清、尿液样本：

2. 血清、血浆样本：每 40 μL样本加入 20 μL 1N HCl，混匀，室温孵育 10min，然后加入 20 μL 1N NaOH 进行中和。混合均匀后再使用 1×Assay buffer对血清/血浆样本进行稀释，稀释后的样本需立即检测。人血清：活化样本 80 μL+720 μL 1×Assay buffer；小鼠血清：活化样本 20 μL+480 μL 1×Assay buffer；人/小鼠血浆：活化样本 80 μL+80μL 1×Assay buffer。

2. 血清、血浆样本：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。样本在活化后细胞上清、尿液样本须乘以稀释因子 1.4，血清、血浆样本本须乘以稀释因子 2。如果样本的 OD值超过标准曲线的最高浓度，须用 1×Assay Buffer稀释活化的样本后再次检测。

注意：

实验步骤

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

2. 除去每孔中的液体并洗涤。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

3. 加标准品：标准品孔加入 100 μL稀释的标准品。

4. 加样品：血清/血浆：样本孔加入 50 μL 1×Assay Buffer和 50 μL活化样本；细胞培养上清/尿液：样本孔加入 100 μL活化样本（详见样本制备）。

5. 加检抗：每孔加入 50 μL 1×TGF-β1 Detect Antibody，保证步骤 3、4、5连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

6. 重复步骤 2中的洗涤 6次。

7. 每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 45 min，注意避光。

8. 按照步骤 3重复洗涤过程 6次。

9. 每孔加入 100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 5-30 min。

10. 每孔加入 100 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

10.

11. 在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

11.

注意：5-30 min显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间。

注意：

1) 肉眼观察：标曲 S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；

2) 仪器判断：630 nm左右波长下，标曲 S1孔的 OD值达到 0.5-0.7、S5孔的 OD值达到 0.05-0.08、Blank孔的 OD值小于 0.05时，即可终止。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD值。

2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。如果血清/血浆样本按照说明书进行稀释，人血清最终的稀释倍数为 40，小鼠血清最终的稀释倍数为 100，人/小鼠血浆最终的稀释倍数为 8，细胞上清/尿液样本按照说明书进行稀释，最终的稀释倍数为 1.4。如果样本进行了其它方式的稀释，计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。