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活动截止时间：2024年1月31日
EliKine™ 游离三碘甲状腺原氨酸（fT3）ELISA定量试剂盒是一款基于竞争法原理的高灵敏度免疫检测工具，专为血清、血浆及其他生物液体中活性甲状腺激素 fT3 的精确定量而设计。该试剂盒采用预包被特异性抗体的微孔板，通过生物素-亲和素-HRP 信号放大体系，实现对 fT3 含量的快速、稳定测定，广泛兼容人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、狗、兔子、牛、猴子、鸡、猪等多物种样本。
在甲状腺功能评估中，fT3（游离三碘甲状腺原氨酸）是循环血中真正具有生物活性的甲状腺激素组分，不受甲状腺素结合球蛋白（TBG）浓度变化的影响，因此比总 T3 更能直接、准确地反映甲状腺功能状态。EliKine™ fT3 ELISA Kit 通过竞争法机制：样本中的 fT3 与生物素标记的 fT3 竞争结合微孔板上的特异性抗体；随后加入 Avidin-HRP 复合物，经 TMB 底物显色后，吸光度与样本中 fT3 浓度呈负相关。试剂盒检测范围为 2 pmol/L–32 pmol/L，灵敏度达 2.0 pmol/L，可精准捕捉生理及病理状态下的细微浓度变化。
应用领域：本试剂盒适用于基础医学研究、动物模型甲状腺功能评价、药物干预效果监测及临床前体外诊断试剂开发等场景，为甲状腺相关疾病的机制探索与疗效评估提供可靠数据支持。
| 中文名称 | 游离三碘甲状腺原氨酸(fT3)ELISA定量试剂盒-EliKine™ |
| 英文名称 | EliKine™ Free Triiodothyronine (fT3) ELISA Kit |
| 产品货号 | KTE0004 |
| 反应性 | 人#小鼠#大鼠#山羊#绵羊#狗#兔子#牛#猴子#鸡#猪 |
| 检测类型 | ELISA |
| 检测方法 | 竞争法 |
| 样本类型 | 血清#血浆#其它生物液体 |
| 试剂盒组分 | • fT3 抗体预包被微孔板 • fT3 标准品 • 生物素偶联的fT3 • Avidin-HRP • HRP底物A • HRP底物B • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜. |
| 检测范围 | 2 pmol/L-32 pmol/L |
| 灵敏度 | 2.0 pmol/L |
| 检测指标 | fT3 |
| 注意事项 | • 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。. |
| 保存建议 | 请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：提前 20 min 从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。如果浓缩试剂有结晶析出，轻轻加热直至完全溶解。
注意：提前 20 min 从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。如果浓缩试剂有结晶析出，轻轻加热直至完全溶解。
注意：1 Wash Buffer(20×)：用去离子水 1:20 稀释得到 1× Wash Buffer，4℃保存。
1. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。
1. 血清：2. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃保存，避免反复冻融。
2. 血浆：注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃。避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。
注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃。避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。
注意：1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
1.2. 每孔加入 50 μL fT3 Standard 或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
2. 每孔加入 50 μL fT3 Standard 或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
2.3. 每孔加入 50 μL Biotin Conjugated fT3（空白孔不加）。混匀，给酶标板覆膜，37℃ 孵育 1 h。
3. 每孔加入 50 μL Biotin Conjugated fT3（空白孔不加）。混匀，给酶标板覆膜，37℃ 孵育 1 h。
3.4. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash Buffer 进行洗涤，然后静置 10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash Buffer。
4. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash Buffer 进行洗涤，然后静置 10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash Buffer。
4.5. 每孔加入 50 μL Avidin-HRP（空白孔不加）。混匀，给酶标板覆膜，37℃ 孵育 30 min。
5. 每孔加入 50 μL Avidin-HRP（空白孔不加）。混匀，给酶标板覆膜，37℃ 孵育 30 min。
5.6. 按照步骤 4 重复洗涤过程。
6. 按照步骤 4 重复洗涤过程。
6.7. 每孔加入 50 μL HRP Substrate A 和 50 μL HRP Substrate B，混匀，给酶标板覆膜，37℃ 避光孵育 15 min，远离气流和其他温度波动。
7. 每孔加入 50 μL HRP Substrate A 和 50 μL HRP Substrate B，混匀，给酶标板覆膜，37℃ 避光孵育 15 min，远离气流和其他温度波动。
7.8. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 HRP Substrate 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
8. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 HRP Substrate 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
8.9. 30 min 内测定每孔 450 nm 处的吸光值。
9. 30 min 内测定每孔 450 nm 处的吸光值。
9.1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值。
1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值。
1.2. 标准曲线的绘制：以标准溶液浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。
2. 标准曲线的绘制：以标准溶液浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。
2.A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；
A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。
A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。
A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。
A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。
A: 血浆。
A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。
A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。
A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。
A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。
请等待最新文献信息更新。
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