通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 488)

Name: 通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 488)
Brand: Abbkine
SKU: KTD108
Price: 498 CNY
Availability: InStock

Universal IF Toolkit (Anti-Mouse Dylight 488)

产品货号

KTD108

产品特点：

组分齐全：包含通透、抗原修复、封闭、洗涤、抗体稀释、荧光二抗、核染及抗淬灭封片全部试剂，开盒即可实验。

信号持久：SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂有效延缓荧光衰减，保证长时间观察或共聚焦扫描的图像质量。

高亮二抗：Dylight 488标记抗体亮度高、光稳定性强，与小鼠IgG高亲和力结合，绿色荧光清晰锐利。

绿色易辨：Dylight 488通道呈鲜艳绿色，与DAPI蓝色核染形成直观对比，便于多标共定位分析。

选择规格

100 T

¥498

现货（当天发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物推出的通用型免疫荧光（IF）工具箱（抗小鼠Dylight 488）（Universal IF Toolkit, Anti-Mouse Dylight 488）是一套专为免疫荧光实验设计的完整解决方案，通过Dylight 488标记的山羊抗小鼠二抗与DAPI核染双通道成像，可快速、稳定地实现细胞或组织切片中小鼠来源一抗的荧光检测。

背景与原理

免疫荧光技术（IF）基于抗原-抗体特异性结合原理，将荧光染料标记在抗体上，形成“荧光探针”，用于定位细胞或组织中的目标蛋白。本工具箱中的Dylight 488标记山羊抗小鼠IgG在488 nm激发光下发出明亮绿色荧光，与DAPI的蓝色核染形成高对比度双通道图像；配套的抗原修复、通透、封闭、洗涤及抗淬灭封片体系经过系统优化，可在降低背景的同时显著提升信号强度，适用于贴壁细胞、冰冻或石蜡切片等多种样本。

应用领域

本工具箱适用于细胞生物学、肿瘤研究、神经科学、免疫学等领域，可在细胞爬片、组织冰冻切片、石蜡切片等样本中开展小鼠来源一抗的免疫荧光检测，满足单标、双标及多标共定位实验需求。

产品参数

中文名称	通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 488)
英文名称	Universal IF Toolkit (Anti-Mouse Dylight 488)
产品货号	KTD108
试剂盒组分	• Immunostaining Permeabilization Buffer-100 mL • EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)-100 mL • PBS (20×)-100 mL • Goat Serum Blocking Buffer-20 mL • Antibody Wash Buffer (20×)-25 mL • Antibody Dilution Buffer-50 mL • DyLight 488, Goat Anti-Mouse IgG-100 μL • DAPI (500×)-100 μL • SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium-10 mL
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 该试剂盒中组分EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)，使用过程中请稀释至1×工作液使用，并注意调节PH至8.0。 • 产品经过严苛质量检测。欢迎随时与我们联系，我们致力于客户的成功和满意。
保存建议	-20℃，避光保存12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

固定液（4% 多聚甲醛）
一抗，荧光显微镜，组化笔
去离子水，载玻片，湿盒

试剂准备

Immunostaining Permeabilization Buffer：即用型；4℃保存。

EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0：临用前配制，用去离子水将20× EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0稀释10倍得到EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0，4℃保存。

PBS：临用前配制，用去离子水将20× PBS稀释20倍得到PBS，4℃保存。

Goat Serum Blocking Buffer：即用型；使用前平衡至室温，-20℃保存。

Antibody Wash Buffer：临用前配制；用去离子水将20× Antibody Wash Buffer稀释20倍得到Antibody Wash Buffer；4℃保存。

Antibody Dilution Buffer：即用型；用于稀释一抗和二抗；4℃保存。

DyLight 488, Goat Anti-Mouse IgG：山羊抗小鼠IgG，绿色DyLight 488荧光标记；推荐稀释比例1:200。

1×DAPI Staining Solution：临用前配制，用PBS将DAPI (500×)稀释500倍得到1× DAPI Staining Solution。

SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium：即用型；-20℃避光保存。

实验步骤

A. 对于石蜡切片

脱蜡至水化：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 15 min，二甲苯Ⅱ 15 min，无水乙醇Ⅰ 5 min，无水乙醇Ⅱ 5 min，85%酒精 5 min，75%酒精 5 min，去离子水洗5 min。
抗原修复：切片置于盛满1× EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8 min，停火8 min，转中低火，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将切片置于PBS中在摇床上洗3次，每次3 min。注意：修复液和修复条件根据组织来确定，最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
画圈：切片稍甩干后，用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走）。
封闭：在圈内滴加一滴Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育30 min。
一抗：轻甩Goat Serum Blocking Buffer，在圈内滴加用Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗，于湿盒内室温孵育1 h或4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。注意：荧光共定位检测可先孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。
荧光二抗：切片置于Antibody Wash Buffer中，置于摇床上清洗2次，每次5 min，再置于PBS中，摇床上清洗1次，5 min。切片稍甩干后，在圈内滴加Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗，避光室温孵育1 h。注意：加荧光二抗后，后续所有操作步骤都应在暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种对应的二抗进行第二轮孵育。
复染：切片置于Antibody Wash Buffer中，置于摇床上清洗2次，每次5 min，再置于PBS中，摇床上清洗1次，5 min。在圈内滴加1× DAPI Staining Solution，避光孵育5-10 min，吸弃未反应的1× DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。
封片：用吸水纸吸干切片上的液体，用SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

B. 对于血涂片、冰冻切片和细胞爬片

固定：载玻片用防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），抗凝血经离心分层后涂片；冰冻切片室温风扇吹干；细胞爬片生长。以24孔板细胞爬片为例，吸尽培养液，加入1 mL固定液，室温固定15-30 min，吸弃固定液，PBS洗3次，每次3 min。注意：推荐使用4%多聚甲醛作为固定液，也可根据特定的一抗或样品采用有效成分为乙醇、甲醇或其它类型的固定液。
破膜：加入1 mL Immunostaining Permeabilization Buffer室温孵育20 min，吸弃未反应的Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS洗3次，每次3 min。注意：冰冻切片也可选用含20 μg/mL蛋白酶K的PBS溶液，消化15 min。
封闭：吸弃PBS，加入200 μL Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育30 min。
一抗：吸弃Goat Serum Blocking Buffer，加入200 μL用Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗，于湿盒内，室温孵育1 h或4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。
荧光二抗：吸弃一抗，加入1mL Antibody Wash Buffer，置于摇床上清洗3次，每次5 min，再加入1 mL PBS，置于摇床上清洗1次，5 min。吸弃PBS，加入200 μL用Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗，避光室温孵育1 h。注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换下一种对应的二抗进行第二轮孵育。
复染：吸弃二抗，加入1mL Antibody Wash Buffer在摇床上洗2次，每次5 min，再加入1 mL PBS在摇床上洗1次，5 min。吸弃PBS，加入500 μL 1×DAPI Staining Solution避光孵育5-10min，吸弃1×DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。
封片：滴一滴SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

C. 对于非贴壁细胞

收集细胞：300 g离心5 min，收集细胞，吸弃上清后轻轻弹散细胞。
固定：加入0.5 mL固定液，轻柔悬浮细胞，室温固定15-30 min，300 g离心5 min，吸弃固定液，PBS洗3次，每次3 min。
破膜：加入0.5 mL Immunostaining Permeabilization Buffer，轻柔悬浮细胞，室温孵育20 min，300 g离心5 min，吸弃Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS洗3次，每次5 min。
封闭：300 g离心5 min，吸弃PBS，用100 μL Goat Serum Blocking Buffer悬浮细胞，室温封闭30 min。
一抗：300 g离心5 min，吸弃Goat Serum Blocking Buffer，用100 μL Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗重悬细胞，室温孵育1 h或4℃孵育过夜（推荐使用垂直混匀仪）。注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。
二抗：300 g离心5 min，吸弃一抗，加入0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗3次，每次5 min，再加入0.5 mL PBS，清洗1次，5 min。300 g离心5 min，吸弃PBS，加入100 μL Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗重悬细胞，避光室温孵育1 h。注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种对应的二抗进行第二轮孵育。
复染：300 g离心5 min，吸弃二抗，加入0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗3次，每次5 min，再加入0.5 mL PBS，清洗1次，5 min。300 g离心5 min，吸弃PBS，加入200 μL 1× DAPI Staining Solution重悬细胞，避光孵育5-10 min，离心吸弃1× DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。
封片：300 g离心5 min，吸弃大部分PBS，保留约50 μL液体，轻柔悬浮细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞均匀分布，稍晾干后，滴一滴SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。