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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 乳酸检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量级检测工具，专为定量测定生物样本中 L(+)-乳酸而设计。该试剂盒利用乳酸脱氢酶催化乳酸氧化，同时借助 WST-8 显色体系，将 NADH 的生成量转化为可测的 450 nm 吸光信号，实现对细胞、组织及体液中乳酸含量的快速评估。
背景延伸
乳酸（CH₃CH(OH)COO⁻）是细胞糖酵解途径的关键代谢产物。当氧气供应不足或线粒体功能受限时，丙酮酸在乳酸脱氢酶作用下被还原为 L(+)-乳酸，这一过程在肿瘤细胞、激活的免疫细胞及剧烈运动后的骨骼肌中尤为活跃。血液中 L(+)-乳酸的正常浓度约为 1–2 mmol/L，其异常升高与癌症、糖尿病及乳酸酸中毒等病理状态密切相关。CheKine™ 乳酸检测试剂盒（微量法）通过三羧酸循环相关酶促反应，直接捕获乳酸氧化过程中 NADH 的生成量，并以 WST-8 作为电子受体放大信号，灵敏度优于传统 MTT 体系，无需样本预处理即可覆盖 0.03–2 mM 的线性范围。
应用领域
适用于细胞代谢研究、肿瘤代谢重编程分析、免疫细胞活化评估、药物对线粒体功能影响的高通量筛选，以及运动生理学中乳酸代谢动态监测等场景。
| 中文名称 | 乳酸检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Lactate Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1100 |
| 检测类型 | 三羧酸循环 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • 实验缓冲液 • 乳酸脱氢酶 • 乳酸脱氢酶辅助因子 • WST-8 • 增强剂 • L (+) -Lactate 标准品 (100 mM) |
| 分子 | Lactate |
| 检测指标 | Lactate |
| 注意事项 | • 如果不立即检测，样品可以在-80℃保存一个月。 •建议对样品设置几个稀释度，以确保读数在标准值范围内。 •为保证实验效果，使用新鲜样本是必要的。如果不同时进行测定，最好在样品制备之前完成样品储存。 |
| 保存建议 | 储存在-20°C，收到后立即避光保存。 试剂盒收到后的存储为6个月。 请参阅说明书上各个组件的存储条件。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Lactate Assay Buffer: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Lactate Dehydrogenase: 即用型；整个实验过程中，冰上放置；分装保存于-20℃。
Lactate Dehydrogenase Cofactor: 即用型；整个实验过程中，冰上放置；分装保存于-20℃。
WST-8: 即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装避光保存于-20℃。
Enhancer: 即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装避光保存于-20℃。
Working Reagent：每孔准备 55 µL工作液，现配现用：吸取 31 µL Lactate Assay Buffer，8 µL Lactate Dehydrogenase Cofactor, 5 µL WST-8, 1 µL Enhancer和 10 μL Lactate Dehydrogenase，混合均匀。
L(+)-Lactate Standard (2 mM)：把 20 µL L(+)-Lactate Standard (100 mM)用 980 μL Lactate Assay Buffer稀释至 2 mM，混合均匀；平衡到室温；分装于-20℃保存 6个月。
按下表所示，用 Lactate Assay Buffer将 L(+)-Lactate Standard (2 mM)稀释为 2、1、0.5、0. 25、0. 125、0.0625、0.0313 mM的标准溶液。
| 序号 | L(+)-Lactate Standard (2 mM)体积（µL） | Lactate Assay Buffer体积（µL） | 标准品浓度（mM） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 400 µL | 0 | 2 |
| Std.2 | 200 µL of Std.1 | 200 | 1 |
| Std.3 | 200 µL of Std.2 | 200 | 0.5 |
| Std.4 | 200 µL of Std.3 | 200 | 0.25 |
| Std.5 | 200 µL of Std.4 | 200 | 0.125 |
| Std.6 | 200 µL of Std.5 | 200 | 0.0625 |
| Std.7 | 200 µL of Std.6 | 200 | 0.0313 |
1. 动植物组织：将组织按 1 mL/0.1 g的比例用 Lactate Assay Buffer冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心 5 min，取上清液，置冰上待测。
2. 细胞：收集细胞到离心管内，用冷的 PBS清洗细胞，离心后弃上清，将细胞按 1 mL/500万的比例用 Lactate Assay Buffer冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 12,000 g，4℃离心 5 min，取上清液，置冰上待测。
3. 血清、血浆等液体样本：直接测定。
注意：（1）细胞或组织提取物中的 NADH或 NADPH会产生乳酸测定的背景，为了去除 NADH或 NADPH背景，同样数量的样品可以在没有乳酸脱氢酶的情况下进行检测，然后从乳酸读数中减去背景读数。
（2）内源性乳酸脱氢酶（LDH）可降解乳酸。含有 LDH（如细胞培养液、细胞或组织裂解液等）的样品应通过 10 kDa MW旋转过滤器过滤（12,000 g，4℃离心 10 min，具体过滤步骤以过滤器的说明书为准），以去除所有蛋白质，取滤液进行检测，然后-80℃保存。
（3）如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 450 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 50 |
| Standard | 0 | 50 | 0 |
| Lactate Assay Buffer | 50 | 0 | 0 |
| Working Reagent | 50 | 50 | 50 |
3. 混匀后，37℃避光孵育 30 min，测定 450 nm处吸光度，空白孔记为 A 空，标准孔记为 A 标，测定孔记为 A 测。计算ΔA 测=A 测-A 空，ΔA 标=A 标-A 空。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测小于 0.001可适当加大样本量。如果ΔA 测大于 1.0，样本可用 Lactate Assay Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 y轴，ΔA 标为 x轴，绘制标准曲线。
2. 乳酸含量的计算
将样本的ΔA 测代入方程得到 y值(1 mM=1 μmol/mL)。
（1）按样本鲜重计算
乳酸含量 (μmol/g 鲜重)=y÷W×n
（2）按蛋白浓度计算
乳酸含量 (μmol/mg 蛋白)=y÷Cpr×n
（3）按样本体积计算
乳酸含量 (μmol/mL)=y×n
（4）按细胞数量计算
乳酸含量 (μmol/104 cells)=y÷500×n
V 样：加入样本体积，0.05 mL；W：样本质量，g；V 样总：加入 Lactate Assay Buffer体积，1 mL；n：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；500：细胞总数，500万。
A: 可以使用普通的培养基，做好本底对照就好
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Drug Resistance Updates | 作者: Yang, Tianfeng, et al.
IF: 21.700 | 发表时间: 2025
杂志名称: Bioactive Materials | 作者: Luo, Ying, et al.
IF: 20.300 | 发表时间: 2025
杂志名称: Cellular & Molecular Immunology | 作者: Xu, Xiaojun, et al.
IF: 19.800 | 发表时间: 2025
杂志名称: Advanced Science | 作者: Zheng, Bowen, et al.
IF: 14.100 | 发表时间: 2025
杂志名称: Advanced Science | 作者: Wang, Mengqi, et al.
IF: 14.100 | 发表时间: 2025
杂志名称: Advanced Science | 作者: Lan, Weiren, et al.
IF: 14.100 | 发表时间: 2025
杂志名称: Advanced Science | 作者: Su, Zepeng, et al.
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杂志名称: Chemical Engineering Journal | 作者: Lin, Song, et al.
IF: 13 | 发表时间: 2024
杂志名称: Journal of Experimental & Clinical Cancer Research | 作者: Shen, Dexin, et al.
IF: 12.800 | 发表时间: 2025
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