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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的比色法试剂盒，可在微量体系内快速测定葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase, GOD）活性，广泛适用于血清、血浆、尿液、细胞培养上清及其它生物液体样本。
葡萄糖氧化酶（GOD）是一种由真菌、细菌及某些昆虫分泌的二聚酶，能够催化β-D-葡萄糖氧化生成D-葡萄糖-1,5-内酯并伴随H₂O₂的释放。该反应是糖代谢途径中的关键步骤，因此GOD活性常被用作细胞糖代谢状态的重要指标。CheKine™ 试剂盒利用GOD催化底物葡萄糖产生H₂O₂，H₂O₂与显色物在过氧化物酶作用下形成有色产物，于特定波长下通过比色法定量，吸光度变化与GOD活性成正比，从而间接反映样本中GOD含量。
本试剂盒主要应用于细胞代谢研究，可用于监测细胞培养过程中葡萄糖氧化酶活性变化，评估糖代谢效率；亦适用于体外药物筛选、发酵工艺优化及生物传感器开发等场景。
| 中文名称 | 葡萄糖氧化酶活性(GOD)检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Glucose Oxidase Activity (GOD) Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1310 |
| 检测类型 | 糖代谢 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • 实验缓冲液 (20x) • 葡萄糖 (0.2 M) •H2O2标准品 (0.88 M) • 显色物 • 葡萄糖氧化酶 (对照) |
| 检测范围 | 1-40μM |
| 灵敏度 | 1 μM |
| 分子 | GOD |
| 检测指标 | GOD |
| 注意事项 | • 开盖前，先离心。 • 进行预实验，确保读数在标准值范围内。 • 使用新鲜的样本。如果不立即分析，样本可在-80°C储存一个月。 |
| 保存建议 | 储存在-20°C并避光。 Kit的收纳时间为12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 组分 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| Assay Buffer (20×) | 10 mL (96 T) 50 mL (480 T) | 4℃ |
| Glucose (0.2 M) | 7 mL (96 T) 35 mL (480 T) | -20℃ |
| H2O2 Standard (0.88 M) | 100 μL (96 T) 100 μL (480 T) | -20℃，避光保存 |
| Chromogen | 5.6 mL (96 T) 28 mL (480 T) | -20℃，避光保存 |
| Glucose Oxidase (Control) | 100 μL (96 T) 100 μL (480 T) | -20℃，避光保存 |
1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温；用去离子水 1:20稀释 Assay Buffer (20×)得到 1×Assay Buffer。1×Assay Buffer可用来稀释 H2O2标准品和样本，1×Assay Buffer可在 4℃保存至少两个月。
Glucose (0.2 M)：即用型；使用前，平衡到室温；建议分装后-20℃保存。
H2O2 Standard (0.88 M)：即用型；整个实验过程中，避光放置；建议分装后-20℃避光保存。
Chromogen：即用型；整个实验过程中，避光放置；建议分装后-20℃避光保存。
Working Glucose Oxidase (Control)：提供的葡萄糖氧化酶来自黑曲霉，作为阳性对照。取 2 µL Glucose Oxidase (Control)，先用 998 µL 1×Assay Buffer作为第一步稀释。混匀后，再取 1 µL第一步稀释的溶液，用 399 µL 1×Assay Buffer稀释得到Working Glucose Oxidase (Control)，整个实验过程中，冰上避光放置；未稀释的试剂建议分装后-20℃避光保存。
先配制 10 mM H2O2 Standard：10 µL 0.88 M的 H2O2 Standard用 870 µL的 1×Assay Buffer稀释；再配制 40 µM H2O2 Standard：4 µL 10 mM的 H2O2 Standard用 996 µL的 1×Assay Buffer稀释。使用 40 µM H2O2 Standard，按照下表所示，进一步稀释标准品。
| Standard | Volume of 40 µM Standard (µL) | 1×Assay Buffer (µL) | Final Concentration (µM) |
|---|---|---|---|
| 1 | 200 | 0 | 40 |
| 2 | 150 | 50 | 30 |
| 3 | 100 | 100 | 20 |
| 4 | 50 | 150 | 10 |
| 5 | 25 | 175 | 5 |
| 6 | 10 | 190 | 2 |
| 7 | 5 | 195 | 1 |
用冷的 PBS清洗组织，尽可能去除血液。吸干组织上的水分，称重。加 1 mL/0.1 g 预冷的 1×Assay Buffer匀浆。4℃，12,000 g离心 5 min，取上清液置于冰上做进一步分析。
收集每次检测所需的细胞或细菌数量（约 5×106个细胞），用冷 PBS清洗细胞后，再用 1 mL预冷的 1×Assay Buffer冰浴超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次）。4℃ 12,000 g离心 5 min，取上清液置于冰上做进一步分析。
可直接检测。为确保检测值在标准值范围内，建议将样本用 1×Assay Buffer稀释成不同的浓度后，再进行检测。
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | 对照管（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 1×Assay Buffer | 50 | 0 | 0 | 0 |
| Stds | 0 | 50 | 0 | 0 |
| Sample | 0 | 0 | 50 | 0 |
| Working Glucose Oxidase (Control) | 0 | 0 | 0 | 50 |
| Glucose (0.2 M) | 50 | 50 | 50 | 50 |
盖紧盖子，混匀。37℃孵育 20 min，吸取 60 µL上述混合液到 96孔板或微量玻璃比色皿，每孔迅速加入 40 µL Chromogen（建议使用多通道移液器）。轻敲板，充分混合后，37℃避光孵育 10 min，读取 580 nm处的吸光值 A，分别记为 A 空，A 标和 A 测，计算∆A 标=A 标-A 空，∆A 测=A 测-A 空。
以 H2O2 Standard浓度（µM）为 y轴，ΔA 标为 x轴，绘制标准曲线。将∆A 测代入公式计算出 y (1 µM=1 nmol/mL)，即 H2O2含量。
活性单位的定义：每 g组织蛋白每分钟生成 1 nmol的 H2O2定义为一个酶活力单位。
单位的定义：每 1万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol的 H2O2定义为一个酶活力单位。
单位的定义：每 mL液体样本每分钟生成 1 nmol的 H2O2定义为一个酶活力单位。
单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟生成 1 nmol的 H2O2定义为一个酶活力单位。
W：样品质量，g；T：反应时间，20 min；n：样本稀释倍数；500：细菌或细胞总数，500万；V样：加入样本体积，0.05 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
A: 双氧水标准品配置的时候，离心管里面要用斡旋仪斡旋10s，同时持续换枪头，防止污染。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Advanced Materials | 作者: Ding, Chengjin, et al.
IF: 27 | 发表时间: 2024
杂志名称: Advanced Healthcare Materials | 作者: Jia, Guoping, et al.
IF: 10 | 发表时间: 2024
杂志名称: Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers | 作者: Gu, Jia-Rong, et al.
IF: 6 | 发表时间: 2024
货号：KTB1122
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