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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性检测试剂盒（DTNB比色法）是一款基于 DTNB 显色反应的比色法试剂盒，可在 6.25–400 nmol/mL 范围内快速、定量测定动植物组织、细胞、细菌或真菌、血清（浆）等样本中的谷胱甘肽过氧化物酶活性。
背景与原理
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是细胞内清除活性氧（ROS）的关键抗氧化酶，通过催化还原型谷胱甘肽（GSH）将有机过氧化物及 H₂O₂ 还原，生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），从而减轻氧化损伤。本试剂盒利用 DTNB（5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)）与 GSH 反应生成黄色产物，在 412 nm 处具有特征吸收峰；GSH-Px 活性越高，GSH 消耗越多，DTNB 显色强度随之降低。通过测定反应前后吸光度的变化，即可计算样本中 GSH-Px 的活性。
本试剂盒广泛应用于细胞代谢研究、氧化应激机制探索、药物或营养素抗氧化功能评价，以及动植物对环境胁迫响应分析等场景。
| 中文名称 | 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性检测试剂盒(DTNB比色法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Glutathione Peroxidase (GSH-Px) Activity Assay Kit (DTNB Assay) |
| 产品货号 | KTB1641 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动植物组织、细胞、细菌或真菌、血清（浆） |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer • Reagent I • Reagent II • Reagent III •Reagent Ⅳ •Reagent Ⅴ •Standard |
| 检测范围 | 6.25-400 nmol/mL |
| 灵敏度 | 6.25 nmol/mL |
| 分子 | 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 检测指标 | 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 注意事项 | 预实验建议；样本均一化（推荐 BCA 法）；自行建标准曲线；安全防护（通风橱、手套等） |
| 保存建议 | 4℃保存避光，6个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 生化试剂具刺激性/毒性 |
*请在实验前检查各组分的量。
*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。
| 自备资源类型 | 资源名称 | 备注 |
|---|---|---|
| 仪器 | 酶标仪 | 能测 412 nm处的吸光度 |
| 耗材 | 96孔酶标板 | 普通透明板 |
| 试剂 | PBS | 样本清洗用 |
| 其他 | 匀浆器（组织样本）、低温离心机、水浴锅、可调节式移液枪及枪头 | 检测量较大时合理使用多通道移液器有助于提高实验效率 |
| 试剂名称 | 试剂准备 | 注意事项 |
|---|---|---|
| Extraction Buffer | 即用型；使用前平衡到室温 | 4℃保存。 |
| Working Reagent Ⅰ | 临用前配制；48 T用 5 mL去离子水充分溶解ReagentⅠ；96 T用 10 mL去离子水充分溶解 ReagentⅠ | 实验过程中避光放置；用不完的试剂-20℃分装避光保存一个月，禁止反复冻融。 |
| Working Reagent Ⅱ | 临用前配制；吸取 21.5 μL Reagent Ⅱ，加入 5 mL去离子水充分混匀，配制好的Working ReagentⅡ当天使用。 | 实验过程中避光放置；4℃避光保存。 |
| Reagent Ⅲ | 即用型；使用前平衡到室温 | 4℃保存。 |
| Reagent Ⅳ | 即用型；使用前平衡到室温 | 4℃保存。 |
| Reagent Ⅴ | 即用型；使用前平衡到室温 | 实验过程中避光放置；4℃避光保存。 |
| Standard储备液 | 临用前配制；加入 10 mL去离子水，充分溶解待用浓度为 1 μmol/mL。 | 实验过程中避光放置；用不完的试剂-20℃分装避光保存一个月，禁止反复冻融。 |
将 1 μmol/mL的 Standard储备液用去离子水配制成终浓度为 400、200、100、50、25、12.5、6.25 nmol/mL的标准品工作液，以去离子水作为空白。每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，须在 4小时内使用。
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水（μL） | 终浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| 1 | 200 µL of 1 μmol/mL | 300 | 400 |
| 2 | 200 µL of 400 nmol/mL | 200 | 200 |
| 3 | 200 µL of 200 nmol/mL | 200 | 100 |
| 4 | 200 µL of 100 nmol/mL | 200 | 50 |
| 5 | 200 µL of 50 nmol/mL | 200 | 25 |
| 6 | 200 µL of 25 nmol/mL | 200 | 12.5 |
| 7 | 200 µL of 12.5 nmol/mL | 200 | 6.25 |
| 空白 | 0 | 200 | 0 |
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。
| 试剂 | 测定管（µL） | 对照管（µL） | 空白管（µL） | 标准管（µL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 50 | 0 | 0 | 0 |
| Working Reagent Ⅰ | 40 | 40 | 0 | 0 |
| Working Reagent Ⅱ | 10 | 10 | 0 | 0 |
混匀，37℃准确孵育 10 min
| 试剂 | 测定管（µL） | 对照管（µL） | 空白管（µL） | 标准管（µL） |
|---|---|---|---|---|
| ReagentⅢ | 400 | 400 | 0 | 0 |
| 样本 | 0 | 50 | 0 | 0 |
充分混匀，4℃，5000 g离心 10 min，取上清。在 96孔板中按照如下方式操作
| 试剂 | 测定孔（µL） | 对照孔（µL） | 空白孔（µL） | 标准孔（µL） |
|---|---|---|---|---|
| 上清 | 100 | 100 | 0 | 0 |
| 标准品 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| 去离子水 | 0 | 0 | 100 | 0 |
| ReagentⅣ | 100 | 100 | 100 | 100 |
| ReagentⅤ | 10 | 10 | 10 | 10 |
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以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。
计算ΔA 标准=A 标准-A 空白，ΔA 测定=A 对照-A 测定。
以标准品浓度为 y轴，ΔA 标准为 x轴，绘制标准曲线。将ΔA 测定代入方程得到 y值（nmol/mL）。
活性单位定义：每克样本在反应体系中每分钟催化 1 nmol GSH氧化定义为一个酶活性单位。
GSH-Px (U/g)=y×V 酶促÷(V 样÷V 样总÷W)÷T×n=y÷W×n
活性单位定义：每 104个细胞、细菌或真菌在反应体系中每分钟催化 1 nmol GSH 氧化定义为一个酶活性单位。
GSH-Px (U/104)=y×V 酶促÷(V 样÷V 样总÷500)÷T×n=0.002y×n
活性单位定义：每毫升液体在反应体系中每分钟催化 1 nmol GSH氧化定义为一个酶活性单位。
GSH-Px (U/mL)=y×V 酶促÷V 样÷T×n=y×n
活性单位定义：每毫克蛋白在反应体系中每分钟催化 1 nmol GSH氧化定义为一个酶活性单位。
GSH-Px (U/ mg prot)=y×V 酶促÷(V 样×Cpr)÷T×n=y÷Cpr×n
参数说明：
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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