羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1490
Price: 268 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Hydroxyproline (HYP) Content Detection Kit

产品货号

KTB1490

产品特点：

验证样本类型齐全：适用于动物组织、细菌、培养细胞、血清（浆）及其他液体样本

微量体系设计：节省珍贵样本，降低实验成本

操作简便：一步水解、显色反应，配套详细样品制备与计算方案

选择规格

96 T/96 S

¥268

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的比色法试剂盒，可在微量体系内快速、稳定地测定动物组织、细菌、培养细胞及血清（浆）等样本中的羟脯氨酸含量，为胶原代谢与纤维化评估提供可靠数据。

背景与原理

羟脯氨酸（HYP）是胶原蛋白特有的氨基酸，广泛分布于皮肤、腱、软骨及血管等胶原组织中，其含量变化直接反映胶原合成与降解的动态平衡，是衡量组织纤维化程度的重要生化指标。CheKine™ 羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒（微量法）基于经典氯胺 T 氧化-对二甲氨基苯甲醛显色反应：样本经酸水解后释放出游离 HYP，HYP 被氯胺 T 氧化生成吡咯环衍生物，再与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在 560 nm 处呈现特征吸收峰。通过测定 560 nm 吸光值即可定量计算样本中的 HYP 含量。

应用领域

本试剂盒主要用于细胞代谢相关研究，可广泛应用于：

组织纤维化机制与药物干预评价
肿瘤细胞外基质（ECM）重塑研究
干细胞分化过程中胶原合成监测
生物材料植入后组织整合评估

产品参数

中文名称	羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Hydroxyproline (HYP) Content Detection Kit
产品货号	KTB1490
检测方法	比色法
样本类型	动物组织、细菌和细胞、血清（浆）或其他液体
试剂盒组分	•Cell Extraction Buffer•Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard
检测范围	•测定动物组织、细菌和细胞、血清（浆）或其他液体样本内的羟脯氨酸（HYP）含量。 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。
分子	Hydroxyproline (HYP)
检测指标	Hydroxyproline (HYP)
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	4℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测 560 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管、玻璃管
水浴锅、离心机、烘箱
去离子水、浓盐酸、无水乙醇、异丙醇、氢氧化钠

试剂准备

Tissue Extraction Buffer：即用型；6 mol/L盐酸，浓盐酸：去离子水（V/V）=1:1，室温保存。（自备）

Cell Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

注意：本试剂盒组分均有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。

Standard：即用型；0.5 mg/mL L-羟基脯氨酸标准品；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

标准品制备

使用 0.5 mg/mL L-羟基脯氨酸标准品，按照下表所示，进一步稀释成标准品：

序号	Standard体积（μL）	去离子水体积（μL）	浓度（μg/mL）
Std.1	24 μL 0.5 mg/mL Standard	376	30
Std.2	200 μL of Std.1 (30 μg/mL)	200	15
Std.3	200 μL of Std.2 (15 μg/mL)	200	7.5
Std.4	200 μL of Std.3 (7.5 μg/mL)	200	3.75
Std.5	200 μL of Std.4 (3.75 μg/mL)	200	1.875
Std.6	200 μL of Std.5 (1.875 μg/mL)	200	0.938
Std.7	200 μL of Std.6 (0.938 μg/mL)	200	0.469
Std.8	200 μL of Std.7 (0.234 μg/mL)	200	0.234

注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

1. 动物组织

称取约 0.2 g样品于玻璃管，加入 2 mL Tissue Extraction Buffer，置于 110℃烘箱，水解 6-12 h，冷却后用氢氧化钠溶液调节 ph为 7.0左右，用去离子水定容至 4 mL，12,000 g，25℃，离心 20 min，取上清待测。

2. 细菌和细胞

收集 500万细菌或细胞到离心管内，加入 1 mL Cell Extraction Buffer，于高压消毒器中 15磅保持 30 min，自然降压后用浓盐酸调节 ph为 7.0左右，用去离子水定容至 2 mL，12,000 g，25℃，离心 20 min，取上清待测。

3. 血清中游离 HYP 提取

取 0.1 mL血清，加入 0.5 mL无水乙醇使蛋白质沉淀，8,000 g，4℃离心 5 min。将上清倒入另一个 EP管，氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入 0.2 mL 50%异丙醇，充分溶解混匀待测。

(1) 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

(2) 提取过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质，不影响实验。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 560 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）

试剂	空白管（μL）	标准管（μL）	测定管（μL）
样本	0	0	60
Standard	0	60	0
ReagentⅠ	60	60	60
混匀，室温静置 20 min
Reagent II	60	60	60
去离子水	180	120	120

3. 充分混匀，60℃反应 20 min，取出后室温静置 15 min，取 200 μL至微量玻璃比色皿或 96孔板中，记录 560 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.005可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 30 μg/mL的ΔA 标准，样本可用相应提取液一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (µg/mL)。

2. HYP含量的计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

HYP(µg/mg prot)=x÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

HYP(µg/g 鲜重)=20x÷W

（3）按照细菌或细胞数量计算

HYP(µg/104)=10x÷n

（4）按样本体积计算：

HYP(µg/mL)=10x

V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，0.06 mL；V 组总：加入组织的提取液体积，4mL；V 胞总：加入细菌或细胞的提取液体积，2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本重量，g；n：细菌或细胞数量，万；2：血清吹干后复溶的倍数。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

Comparison of different decellularization methods for human anterior lens capsules.

杂志名称: BMC ophthalmology | 作者: Yu, Jianfeng, et al.

IF: 1.700 | 发表时间: 2025

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