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生物素偶联试剂盒-LinKine™

LinKine™ Biotin Labeling Kit

产品货号
KTL0120

产品特点:

  • 活化生物素已预配制,开盖即用,无需额外活化步骤。
  • 灵活适配 30 µg–1.5 mg 抗体或蛋白,实验规模可自由调整。
  • 支持自定义摩尔比、缓冲液 pH 及反应时间,实现不同标记密度。
  • 配套 50 kD 超滤柱,10 分钟内完成脱盐纯化,回收率高。
  • 全程室温操作,无需有机溶剂,对蛋白活性影响极小。
  • 选择规格

    3×100 μg
    ¥1478
    现货(次日发货)
    1 mg
    ¥2378
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    LinKine™ 生物素偶联试剂盒 (LinKine™ Biotin Labeling Kit) 是一套专为抗体、酶、蛋白 A/G 等生物大分子进行伯胺位点生物素化而设计的即用型化学标记系统。试剂盒以活化生物素为核心,通过一步反应即可将生物素共价偶联到目标蛋白的赖氨酸 ε-氨基上,为后续链霉亲和素-生物素放大检测提供高亲和力、高灵敏度的标记蛋白。

    生物素(Biotin)是一种水溶性维生素(分子量 244 Da),其独特的脲基环-四氢噻吩结构可与亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)形成皮摩尔级的高亲和力结合(Kd ≈ 10⁻¹⁵ M)。LinKine™ 试剂盒利用活化生物素 NHS-ester与蛋白伯胺发生酰胺化反应,在温和条件下实现高效偶联。反应完成后,通过随附的 50 kD 超滤纯化柱即可快速去除游离生物素,获得高纯度、高活性的生物素标记蛋白,适用于ELISA、Western blot、免疫层析、流式细胞术等多种免疫检测平台。

    应用领域

    LinKine™ 生物素偶联试剂盒广泛应用于免疫诊断试剂开发、蛋白-蛋白相互作用研究、单分子检测、纳米探针构建等场景,特别适合需要链霉亲和素放大系统的高灵敏度检测实验。

    生物素偶联试剂盒-LinKine™

    产品参数

    中文名称 生物素偶联试剂盒-LinKine™
    英文名称 LinKine™ Biotin Labeling Kit
    产品货号 KTL0120
    偶联物 Biotin
    试剂盒组分 • 活化的 Biotin 偶联物溶液
    • Biotin 偶联缓冲溶液
    • 纯化柱(0.5 mL,50KD)
    注意事项 • 待标记样本的初始浓度不应低于2 mg/ml。
    • 请注意,缓冲液中不允许含有氨基的组分,这会影响偶联效果。
    • 少量的BSA不会影响结果,建议使用PBS作为所需的缓冲液。
    保存建议 该试剂盒在4℃条件下可保存6个月。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    注意:该试剂盒所配纯化柱适用于分子量在100KD到200KD的样本;如有未使用完的试剂,请及时密封保存于-20℃。

    自备耗材

    • 待标记样本
    • 移液器和吸头
    • 去离子水
    • PBS(pH 7.4)

    样本制备

    待标记样本的初始浓度应高于2 mg/mL,建议蛋白浓度达到2.5 mg/mL以上效果最佳,否则实验前需进行浓缩以提高浓度。待标记样本的组分(或储存缓冲液)应符合如下要求:

    1. 不含有氨基成分,否则会影响偶联效果。
    2. 少量BSA不会影响偶联效果,但建议使用PBS作为缓冲液。
    3. 若样本中含有可能干扰标记的物质,建议用PBS置换缓冲液,具体方法为:将样本加入超滤管中,加入200-150 µL PBS,12,000 g、4℃、离心10 min,弃掉滤液;再次补齐PBS,12,000 g、4℃、离心10 min;离心后取出超滤管内芯,倒置于干净外管中,4,000 g、4℃、离心2 min,收集置换缓冲液后的样本。

    待标记样本的缓冲液应满足如下要求:

    成分要求
    PH6.5-8.0
    无胺缓冲液 MES HEPES,PBS✓可含有
    螯合剂 (e.g. EDTA)✓可含有
    甘油(Glycerol)含量 < 50%
    牛血清白蛋白(BSA)含量 < 0.1%
    甘氨酸(Glycine)✗不能含有
    含氨基成分✗不能含有

    实验步骤

    注意:请根据实际样品量,相应放大或缩小试剂盒各组分在反应体系中的体积。

    1. 偶联物制备

    不同规格建议的最适标记样本量和标记体系如下:

    试剂盒规格最适标记的样本量最适的标记体系
    3×100 µg3×100 µg3×50-3×75 µL
    1 mg1 mg500-750 µL
    注意:以下操作步骤是以3×100 µg规格为例,其它规格的试剂用量请进行等比调整。如果需要调整体积,请保持样本量不变更改标记体系中Biotin labeling solution、Activated Biotin solution和去离子水的体积。为保证偶联效果,建议样本的原始浓度应大于1 mg/mL。对于其它规格,请参阅上表进行等比放大。
    注意:步骤(1)/(2)属于标记步骤。
    1. 向待标记抗体溶液中加入15 µL Biotin labeling solution,用移液器温和混匀。
    2. 吸取7.5 µL Activated Biotin solution至步骤(1)反应液中,加去离子水至150 µL,温和混匀,37℃、避光、静置1 h。
    3. 向步骤(2)反应液中加入适量PBS(补齐至总体积500 µL),温和混匀,将溶液移至纯化柱,4℃、12,000 g下离心10 min。
    4. 弃去滤液,加适量PBS(补齐至总体积500 µL)到纯化柱,4℃、12,000 g离心10 min。
    5. 取出纯化柱倒置于干净试管中,4℃、4,000 g离心2 min,试管溶液即为偶联产物。
    注意:步骤(3)/(4)/(5)属于纯化步骤。

    2. 偶联物储存

    偶联物避光条件下可稳定保存一个月。若需长期储存,请加入等体积甘油分装并于-20℃下避光保存,避免反复冻融。

    常见问题

    问1:浓缩后抗体浓度仍低于2 mg/mL?
    答:如果浓缩后抗体浓度仍小于2 mg/mL可适当调整反应体积,但最终浓度应大于1 mg/mL。步骤(1)中Biotin labeling solution应为最终反应液10%,步骤(2)中可不添加去离子水,Activated Biotin solution保持不变,您也可以根据自己实验进行适当调整。
    问2:待标记样本分子量大小不同,如何选择合适的纯化柱?
    答:本产品配备的超滤管适用于分子量为100-200 KD的样本。若您需要偶联的样本分子量大于200 KD或小于100 KD,为保证偶联最佳效果,需另行配备大小合适的超滤管。
    问3:待标记分子分子量小于100 KD?
    答:对于分子量小于100 KD的分子,应使用相应纯化柱或分子筛柱。分子量介于50-100 KD之间,您可以使用试剂盒中的纯化柱,但是收率可能会低一些。如果分子量与50 KD相近,可在37℃下加入30 µL 0.5 µM NH4 Cl孵育10 min。
    问4:对于不同分子量的样本,偶联效果是否有差异?
    答:对于分子量小于5 KD的分子,偶联效果较差,您可以适当增加分子用量。

    注意事项

    1. 不同批次号、不同的厂家的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
    2. 混合或复溶组分时,避免产生气泡。如有未使用完的试剂,请及时密封保存于4℃。
    3. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
    4. 保持好的实验习惯,穿戴好手套、实验服、口罩、防目镜等防护工具后再开始实验。

    常见问题

    Q: 试剂盒做蛋白偶联之后,如何检测偶联是否成功?

    A: 先把抗体包被在ELISA板上,然后用biotin偶联的目蛋白去识别结合,再用HRP标记的链霉亲和素去结合biotin,最后显色就可以了,只要有颜色的变化,说明就是偶联上了,同时建议做阴性对照。

    Q: 该试剂盒标记生物素的原理是什么?

    A: Biotin上游离的羧基识别蛋白多肽上的游离氨基,并发生氨基与羧基脱水缩合,产生酰氨键。

    Q: 该试剂盒偶联500 μg蛋白,至少需要多大规格?

    A: 根据使用者蛋白样本种类,以及蛋白的实际克重,来为客户配置最合适的规格。例如:500 μg蛋白如果是一份蛋白样本的话的量,需要使用1000 mg的规格;如果是5份不同的蛋白,每份100 μg,建议购买五个100 μg规格的该试剂盒。如有疑问,请联系support@abbkine.com。

    Q: 该试剂盒是多物种通用型吗?

    A: 是通用型的。

    Q: 待偶联物是IL-10,分子量是18.6kD,估计是要偶联1mg的蛋白, 买个多大规格的?

    A: 推荐1mg的规格,选用超滤管3K的超滤管的型号。

    Q: 多少样本可以偶联上标记物?

    A: 如按照说明书的操作进行实验,可保证超过90%的偶联效率。

    Q: 怎么判断样本偶联成功?

    A: 做吸光度检测和免疫实验检测。

    Q: 怎么判断蛋白上是否有游离的氨基?

    A: 如果是普通蛋白分子的话,查询蛋白的氨基酸一级结构就可以知道是否有游离氨基。

    文献引用

    请等待最新文献信息更新。

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