超氧阴离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 超氧阴离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1210
Price: 189 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Superoxide Anion Assay Kit

产品货号

KTB1210

产品特点：

微量体系：仅需 20–50 µL 样本即可在 96 孔板完成检测，节省珍贵样品。

宽检测范围：0.0125–0.5 mg/mL，灵敏度低至 0.0125 mg/mL，兼顾低丰度与高浓度样本。

自带 NaNO₂ 标准品与标准曲线模板，简化实验设计与结果计算。

配套详细样本制备流程，适用于植物、动物组织、血清及培养细胞等多类型样本。

避光 4 ℃ 保存，冰袋运输，到货后 6 个月内性能稳定。

选择规格

48 T/48 S

¥189

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥298

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的CheKine™ 超氧阴离子含量检测试剂盒（微量法） (CheKine™ Micro Superoxide Anion Assay Kit) 是一种基于比色法的微量检测体系，可在 96 孔板内快速、定量地测定植物组织、动物组织、血清及培养细胞等样本中超氧阴离子（O₂⁻）的生成量。

超氧阴离子（Superoxide Anion, O₂⁻）是活性氧（ROS）家族中最先产生的成员，在免疫防御、信号转导及细胞代谢中扮演重要角色；当其过量累积时，会对细胞膜脂质、蛋白质及核酸造成氧化损伤，进而诱发代谢紊乱与多种病理过程。本试剂盒利用经典的 Griess 衍生-比色法：样本中的 O₂⁻与试剂系统中的特定底物反应，生成稳定的亚硝酸根（NO₂⁻）；NO₂⁻再与显色剂偶联生成紫红色偶氮化合物，在 540–570 nm 处产生特征吸收峰。吸光度与 O₂⁻浓度呈正相关，通过标准曲线即可换算出样本中超氧阴离子的实际含量。

应用领域

该试剂盒主要用于细胞代谢与氧化应激研究，可广泛应用于：

植物逆境生理及抗氧化机制研究
动物组织缺血-再灌注、炎症或药物诱导的氧化损伤模型
细胞水平 ROS 产生与清除动力学分析
血清或培养液中抗氧化活性评价

产品参数

中文名称	超氧阴离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Superoxide Anion Assay Kit
产品货号	KTB1210
检测类型	氧化应激
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer • Reagent I • Reagent II • Reagent III • NaNO2 Standard (10mmoL/L)
检测范围	0.0125-0.5 mg/mL
灵敏度	0.0125 mg/mL
分子	Superoxide Anion
检测指标	Superoxide Anion
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 • 自备三氯甲烷。 •每个样本都需要设置一个对照孔排除样本本身存在的NO2－的影响，因此96T只能测48个样本。
保存建议	收到货后，请避光保存于4℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计（能测 540 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机，水浴锅
三氯甲烷、去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Extraction Buffer	80 mL (48 T) 80 mL×2 (96 T)	4℃
ReagentⅠ	6 mL (48 T) 12 mL (96 T)	4℃
ReagentⅡ	9 mL (48 T) 18 mL (96 T)	4℃，避光保存
ReagentⅢ	9 mL (48 T) 18 mL (96 T)	4℃，避光保存
NaNO₂ Standard (10 mmoL/L)	0.5 mL	4℃

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

注意：ReagentⅠ有毒且有刺激性气味，ReagentⅡ有毒，建议在通风橱进行实验。

ReagentⅢ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

标准曲线设置

取 20 µL的 NaNO₂ Standard (10 mmoL/L)，用 980 µL Extraction Buffer稀释至 200 µmol/L，然后按下表所示，用 Extraction Buffer进一步稀释标准品。

序号	200 µmol/L NaNO₂ Standard体积（µL）	Extraction Buffer体积（µL）	标准品浓度（µmoL/L）
Std.1	200	0	200
Std.2	200 µL of Std.1 (200 µmoL/L)	200	100
Std.3	200 µL of Std.2 (100 µmoL/L)	200	50
Std.4	200 µL of Std.3 (50 µmoL/L)	200	25
Std.5	200 µL of Std.4 (25 µmoL/L)	200	12.5
Std.6	200 µL of Std.5 (12.5 µmoL/L)	200	6.25
Std.7	200 µL of Std.6 (6.25 µmoL/L)	200	3.125

注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存一个月。样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

动物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer捣碎，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
细胞：收集 500万细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
血清（浆）等液体样本：直接测定。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
操作表：

试剂	对照管（μL）	空白管（μL）	测定管（μL）	标准管（μL）
不同浓度 Std.	0	0	0	40
样本	40	0	40	0
Extraction Buffer	140	100	60	60
ReagentⅠ	0	80	80	80
混匀，37℃水浴 20 min	-	-	-	-
ReagentⅡ	60	60	60	60
ReagentⅢ	60	60	60	60
混匀，37℃水浴 20 min	-	-	-	-
三氯甲烷	100	100	100	100

混匀，8,000 g，25℃离心 5 min，小心吸取上层水相 200 μL上清于 96孔板或微量玻璃比色皿中测定 540 nm处吸光值，记为 A。ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：每个样本都需要设置一个对照孔排除样本本身存在的 NO₂^-的影响。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.005可适当加大样本量。如果ΔA大于 1.0，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 y轴，ΔA 标准为 x轴，绘制标准曲线。ΔA 测定带入方程得到 y值（µmol/L）。

2. 超氧阴离子含量的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算

超氧阴离子含量(µmol/mg prot)=0.002y÷Cpr

超氧阴离子产生速率(µmol/min/mg prot)=0.0001y÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

超氧阴离子含量(µmol/g 鲜重)=0.002y÷W

超氧阴离子产生速率(µmol/min/g 鲜重)=0.0001y÷W

(3) 按照血清（浆）体积计算

超氧阴离子含量(μmol/mL)=0.002y

超氧阴离子产生速率(µmol/min/mL)=0.0001y

(2) 按细胞数量计算

超氧阴离子含量(µmol/10⁴)=0.002y÷N

超氧阴离子产生速率(µmol/10⁴)=0.0001y÷N

V 样本：参与反应样本体积，0.04 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，20 min；V 提取：提取过程中加入的提取液体积，1 mL；W：样本鲜重，g；10^-3：1 mL=10^-3 L。N：细胞数量，500；2：2分子 O₂^-参与反应生成 1分子 NO₂^-。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

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