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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的CheKine™ 细胞亚铁离子含量检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro Cell Ferrous Ion Content Assay Kit）是一种基于比色法的微量检测工具，可在 593 nm 处通过蓝色配合物吸光度快速、准确地定量细胞样本中的 Fe²⁺ 含量。
铁是人体必需的微量元素之一，其中亚铁离子（Fe²⁺）是血红素和血红蛋白的核心组分，并在多种酶促反应及氧化还原过程中扮演关键角色。本试剂盒通过酸性条件下 Fe²⁺ 与三吡啶基三嗪（TPTZ）形成蓝色配合物的原理，在 593 nm 处产生特征吸收峰；吸光度值与样本中 Fe²⁺ 浓度成正比，从而实现对细胞裂解液中亚铁离子的定量分析。
适用于细胞代谢研究场景，可用于评估细胞铁稳态、氧化应激及铁死亡相关机制，广泛服务于基础科研、药物筛选及疾病模型构建等方向。
| 中文名称 | 细胞亚铁离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Cell Ferrous Ion Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1116 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 检测范围 | 0.78-50 nmol/mL |
| 灵敏度 | 0.78 nmol/mL |
| 分子 | 细胞亚铁离子 |
| 检测指标 | 细胞亚铁离子 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。为避免污染，建议将 Reagent I 分装后使用。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Standard：临用前配制；每瓶加入 1,020 μL Reagent II 充分溶解，即 10 µmol/mL Fe2+标准品；当天用完。
100 nml/mL Fe2+标准品：10 μL 10 µmol/mL Fe2+标准品用 990 μL Reagent II 稀释；使用 100 nmol/mL Fe2+标准品，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | Reagent II 体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 400 μL of 100 nmol/mL Standard | 400 | 50 |
| Std.2 | 400 μL of Std.1 (50 nmol/mL) | 400 | 25 |
| Std.3 | 400 μL of Std.2 (25 nmol/mL) | 400 | 12.5 |
| Std.4 | 400 μL of Std.3 (12.5 nmol/mL) | 400 | 6.25 |
| Std.5 | 400 μL of Std.4 (6.25 nmol/mL) | 400 | 3.13 |
| Std.6 | 400 μL of Std.5 (3.13 nmol/mL) | 400 | 1.56 |
| Blank | 0 | 400 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：建议使用新鲜样本。亚铁离子易被氧化，样本放置时间较长或反复冻融会造成结果不准确。
细胞：收集 1,000万细胞到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 0.5 mL Extraction Buffer，置冰上裂解 10 min，每 2 min上下颠倒混匀一次，裂解完成后置冰上待测。
注意：
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 593 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中操作）：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 200 |
| Standard | 0 | 200 | 0 |
| Reagent II | 200 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，37℃孵育 10 min，流水冷却至室温，空白管和标准管取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 593 nm处吸光值。测定管进行以下操作：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 氯仿 | 0 | 0 | 100 |
充分涡旋震荡 2 min，10,000 g，室温离心 5 min，小心吸取测定管上层无机相 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 593 nm处吸光值
3. 空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. 亚铁离子含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算
亚铁离子(nmol/mg 蛋白)=(V 样×x)÷(V 样×Cpr)=x÷Cpr
（2）按细胞数量计算：
亚铁离子(nmol/106 cell)=(V 样×x)÷(n×V 样÷V 样总)=0.5x÷n
V 样：加入反应体系中样本体积，0.2 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，0.5 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；n：细胞数量，以 106计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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