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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 总铁离子含量检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro Total Iron Ion Content Assay Kit）是一款基于比色法的微量检测工具，可在 593 nm 波长下快速测定细胞及多种生物样本中的总铁离子含量，为细胞代谢研究提供可靠数据。
铁是人体必需的微量元素，是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及多种酶系的核心组分，参与氧的运输与脂肪氧化。铁缺乏会导致贫血、代谢紊乱及免疫功能下降。本试剂盒利用亚硫酸钠将 Fe³⁺ 还原为 Fe²⁺，Fe²⁺ 在酸性环境中与三吡啶基三嗪形成稳定的蓝色络合物，593 nm 处吸光度与总铁离子浓度成正比，从而定量检测动植物组织、血清（浆）或其他液体样本中的总铁离子水平。
应用领域：细胞代谢研究、细胞铁稳态评估、营养与贫血机制探索、药物对铁代谢影响分析等细胞类实验场景。
| 中文名称 | 总铁离子含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Total Iron Ion Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1113 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer Ⅰ •Extraction Buffer II • Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 检测范围 | 5-100 nmol/mL |
| 灵敏度 | 5 nmol/mL |
| 分子 | 铁离子 |
| 检测指标 | 铁离子 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction BufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Extraction Buffer II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。为避免污染，建议将 Reagent I 分装后使用。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
Standard：即用型；10 µmol/mL Fe3+标准溶液；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。使用 10 µmol/mL Standard，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | Reagent II 体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 20 μL of 10 µmol/mL Standard | 1980 | 100 |
| Std.2 | 375 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 125 | 75 |
| Std.3 | 250 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 250 | 50 |
| Std.4 | 150 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 350 | 30 |
| Std.5 | 100 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 400 | 20 |
| Std.6 | 50 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 450 | 10 |
| Std.7 | 25 μL of Std.1 (100 nmol/mL) | 475 | 5 |
| Blank | 0 | 500 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
1. 组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction BufferⅠ，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 血清（浆）等液体样本：取 55 μL样本，加入 165 μL Extraction Buffer II 混合均匀（即稀释 4 倍），置冰上待测。如果样本浑浊，5,000 g，4℃离心 5 min，取上清液，置冰上待测。
注意：1. 本试剂盒提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，用去离子水重新提取样本后进行蛋白浓度测定。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
2. 为避免铁污染，所有的样本处理和转移操作不要使用铁制器具。如有需要，可用 1%稀盐酸浸泡处理所用器具 4 h。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 593 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中操作）：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 200 |
| Standard | 0 | 200 | 0 |
| Reagent II | 200 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，37℃孵育 40 min，流水冷却至室温，空白管和标准管取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 593 nm处吸光值。测定管进行以下操作：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 氯仿 | 0 | 0 | 100 |
充分涡旋震荡 2 min，10,000 g，室温离心 5 min，小心吸取上层无机相 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 593 nm处吸光值
3. 空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：1. 空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.02可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 0.6，样本可用对应的 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
2. 每次检测不要超过 3个样本，反应完成后需立即完成吸光值检测，避免造成实验误差。
3. 氯仿会腐蚀 96孔板，所以在吸取上层无机相时注意不要吸到下层氯仿。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. 总铁离子含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算
总铁离子(nmol/mg 蛋白)=(V 样×x)÷(V 样×Cpr)=x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
总铁离子(nmol/g 鲜重)=(V 样×x)÷(W×V 样÷V 样总)=x÷W
（3）按样本体积计算：
总铁离子(nmol/mL)=F×x=4x
V 样：加入反应体系中样本体积，0.2 mL；V 样总：加入 Extraction BufferⅠ体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；F：液体样本稀释倍数，4。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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