发光法支原体检测试剂盒

Name: 发光法支原体检测试剂盒
Brand: Abbkine
SKU: BMC1041
Price: 398 CNY
Availability: InStock

Luminescent Mycoplasma Detection Kit

产品货号

BMC1041

产品特点：

操作极简：两步加样，15 min出结果，适配96孔高通量平台

信号稳定：荧光素酶-底物体系发光持续时间长，读板窗口宽

灵敏度高：可检测低至10² CFU/mL的支原体污染

样本兼容：直接取细胞培养上清，无需离心、抽提或PCR扩增

组分齐全：含阳性对照，结果判断一目了然

选择规格

20 T

¥398

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200 T

¥1398

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的发光法支原体检测试剂盒 (Luminescent Mycoplasma Detection Kit)是一种基于荧光素酶-底物发光反应的快速检测体系，可在15 min内完成细胞培养物中支原体污染的定性或半定量筛查，适用于常规细胞房、生物制药工艺及科研实验室的日常质控。

支原体（Mycoplasma）是目前已知最小、无细胞壁的原核微生物，直径仅0.2–0.8 μm，可穿透常规0.22 μm除菌滤膜，且对青霉素、β-内酰胺类抗生素天然耐药。其贴壁或游离于细胞表面的生活方式，使宿主细胞基因表达、代谢通路及生长动力学发生显著偏移，导致实验结果不可重复、数据失真。因此，建立快速、灵敏的支原体监测手段已成为细胞培养质控的关键环节。

本试剂盒利用荧光素酶催化底物产生持续稳定的发光信号，当样本中存在支原体时，其特有的酶系或代谢产物可放大发光强度，通过化学发光仪读取相对光单位（RLU），实现污染与否的判定。

应用领域

• 细胞库建库与放行检测
• 生物制药细胞基质质控
• CAR-T、抗体、疫苗等细胞生产过程的支原体监测
• 科研实验室细胞系日常污染筛查

产品参数

中文名称	发光法支原体检测试剂盒
英文名称	Luminescent Mycoplasma Detection Kit
产品货号	BMC1041
样本类型	细胞
产品形式	液体形式
试剂盒组分	•Mycoplasma Assay Buffer •Luciferase •Mycoplasma Substrate A •Mycoplasma Reagent B •Postive Control
注意事项	•所有试剂避免反复冻融，建议分装使用，分装的容器不能有ATP污染。
保存建议	-20℃，避光保存12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

无菌离心管、可调节式移液枪及枪头
离心机、96 孔全黑酶标板或全白酶标板
灭菌水、PBS或新鲜培养基
发光检测仪或多功能酶标仪

试剂准备

Mycoplasma Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃，避光保存。

Luciferase：即用型；-20℃保存。

Mycoplasma Reagent A：临用前配制；用 Mycoplasma Assay Buffer 溶解 Mycoplasma Substrate A 中，然后将溶解后的 Mycoplasma Substrate A和 Luciferase加入到 MycoplasmaAssay Buffer瓶中，充分混匀后得到 Mycoplasma Reagent A；按使用需求分装并避光保存于-20℃；使用前，平衡到室温。

Mycoplasma Reagent B：即用型；使用前，平衡到室温；按使用需求分装-20℃保存。

Postive Control：即用型；使用前，平衡到室温；按使用需求分装-20℃保存。

注意：所有试剂避免反复冻融，建议分装使用，分装的容器不能有 ATP污染。

样本制备

贴壁细胞：细胞消化前取 0.2-1 mL细胞培养上清，1,500 rpm离心 5 min，取上清液用于检测。
悬浮细胞：细胞传代时取培养液 0.2-1 mL细胞培养液，1,500 rpm离心 5 min，取上清液用于检测。
复苏细胞：冻存细胞解冻后添加进新鲜的完全培养基，培养 1-2 h后取 0.2-1 mL细胞培养液，1,500 rpm离心 5 min，取上清液用于检测。

注意：

细胞传代后或消化后，支原体检测信号将会降低。如在细胞传代或消化后取样检测，需在传代或消化完毕的 24 h后取样。
上清样品最好收集后立即检测，也可以在 4℃放置并当天检测，或者置于-80℃保存半年内检测。低温保存的样品检测的时候需平衡至室温后才可用于检测。

实验步骤

在 96孔全黑或全白酶标板中分别加入 50 μL的待检样品、Postive Control、阴性对照（如灭菌水、PBS、新鲜培养基）。
每孔加入 50 μL Mycoplasma Reagent A，混匀后室温静置 5 min，然后用多功能酶标仪测定化学发光值 RLUA。
每孔加入 50 μL Mycoplasma Reagent B，混匀后室温静置 10 min，然后用多功能酶标仪测定化学发光值 RLUB。
计算比值（Ratio）=RLUB/RLUA。参考表 1，比值大于 1.2说明有支原体污染，比值小于 0.9表示没有支原体污染，比值在 0.9-1.2之间可以将原样品继续培养 24-48 h后重新检测。

表 1. 发光法支原体检测试剂盒结果分析

Ratio	结果分析	处理方法
＜0.9	阴性	无需处理
0.9-1.2	可疑	继续隔离培养培养 24-48 h后再进行测试
＞1.2	阳性	细胞灭菌处理后丢弃或隔离后用专用的支原体预防或去除试剂处理

注意：

多功能酶标仪每孔的读数时间设置为 1,000 ms，需严格按照加入 Mycoplasma Reagent B 10 min后进行检测，切勿提前或延后，否则可能会影响比值在临界值附近样品的结果判断。
本方法的最佳实验温度是 20-25℃，在使用前须确保试剂自然回复到室温，请勿以水浴加热或其他方式加热试剂，如需长期存放试剂，推荐根据每次实验用量进行分装，并避免反复冻融。
皮肤表面含有大量 ATP，处理样品和进行实验时需佩戴手套防止样品和试剂污染而造成假阴性或假阳性。
有些样品如添加了特殊药物或使用某些特殊培养液，可能含有抑制或增强反应的成分而导致假阴性或假阳性，此时可以将样品稀释 10倍后再进行检测，并进一步根据稀释后测定出来的 Ratio来判定是否有支原体污染。
同一样本使用不同批次试剂盒及不同仪器比值（Ratio）会有差异，但不影响定性判断。

结果展示

表 2. 发光法支原体检测试剂盒检测数据示例

样品	阴性样本	阳性样品	阴性对照	阳性对照
HEK293T上清	COS-7上清	Hela上清	10倍稀释 PBS	DMEM
Postive Control
RLUA	250	241	274	391
RLUB	80	118	10809	1279
Ratio	0.32	0.49	39.45	3.27
	0.30	0.32	86.27

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FAQ

问题	解答
请问该产品对发光检测仪器的灵敏度有要求吗？	推荐使用高灵敏度仪器，如几次检测的比率一直约等于 1，可能与检测仪器的灵敏度有关，可将读数时间从 1 s调整到 1-10 s的区间。
配制好的 Mycoplasma Reagent A 溶液可以保存多久？	-20℃避光保存，推荐 3个月内使用，-80℃避光保存，12个月内有效。建议分装，避免反复冻融。
发光法相较于 PCR检测法有何不同？	化学发光法检测更加迅速，可随时且大批量检测细胞培养上清有无支原体污染。
是否可以延长反应时间，增大读数方便计算？	不能，需严格按照操作步骤，不能提前或延后，否则会影响在临界值附近比值的判断。
是否可以改变样本用量，增加检测结果的准确性？	对于 96 孔板，推荐使用 50 μL 样本，可以增加样本量，同时按照比例增加 Mycoplasma Reagent A和 Mycoplasma Reagent B，样本量不能超过 100 μL；不建议减少样本、Mycoplasma Reagent A 和 Mycoplasma Reagent B，检测值在背景附近可能会影响比值及结果判断，可以稀释样本检测。