MDA 丙二醛脂质过氧化检测全指南：原理、方法、实验步骤与试剂盒选择

做氧化应激、心血管、糖尿病并发症、肝肾损伤，甚至铁死亡（ferroptosis）这些课题时，MDA（丙二醛） 基本是那种“方案里一定会写，但心里又不太确定到底在看啥”的指标。

很多课题设计里都会有一句：

检测 SOD、GSH、MDA 等氧化应激和脂质过氧化相关指标。

但一到真正写文章、做图、挑试剂盒时，问题就来了：

• 丙二醛到底反映的是什么过程？丙二醛含量测定能说明什么？
• “丙二醛试剂盒 / MDA检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒”名字一大堆，本质上有区别吗？
• 做 ferroptosis 的时候，“铁死亡检测试剂盒”里，MDA 这项到底处在什么位置？
• 拿到一盒基于微量比色法的 MDA 检测试剂盒，怎样安排实验流程，结果才好写、好解释？

这篇文章就按“真·指南”的思路，从概念、原理到实验和试剂盒选择，一口气讲清楚。

一、先说清楚：MDA、丙二醛、脂质过氧化是一套什么关系？

1. 一个分子，几个常见叫法

先统一一下基本概念：

• MDA：Malondialdehyde 的缩写
• 中文名：丙二醛

所以你平时看到的这些说法，本质上都是在说同一个指标：

• 丙二醛含量测定
• MDA检测
• 丙二醛试剂盒
• MDA检测试剂盒

只是写法不同，侧重点不同而已。

从实验角度看，它们都在回答一个问题：

“样本里，丙二醛（MDA）这个脂质过氧化终末产物有多少？”

2. 脂质过氧化：被打的是“脂”

“氧化应激”这个词很大，蛋白、DNA、脂质都可能被打； 而脂质过氧化，是专门发生在脂质层面的那一条链。

可以粗暴地理解成：

1. ROS（活性氧）多了，
2. 去攻击膜上的多不饱和脂肪酸，
3. 先形成脂质自由基、脂质过氧化物，
4. 再一步步裂解，
5. 产生一堆小分子“尾气”，其中最典型的一类就是——丙二醛（MDA）。

所以：

脂质过氧化是过程，MDA / 丙二醛是这个过程产生的终末产物之一。 做丙二醛含量测定，本质上就是用“末端的小分子”读出上游脂质过氧化的程度。

3. 放到铁死亡（ferroptosis）里看：MDA 在证据链里的位置

铁死亡的核心特点，就是一句话：

铁依赖的脂质过氧化失控。

典型的 ferroptosis 证据链，经常会由几部分拼在一起：

• 脂质 ROS（C11-BODIPY 等探针）；
• 丙二醛（MDA）等脂质过氧化终末产物；
• 细胞内铁负荷变化；
• 抗氧化系统相关蛋白（GPX4、SLC7A11 等）；
• 特征性形态改变。

所以，当别人在找“铁死亡检测试剂盒”时，真正需要的通常是一套组合：

ROS 探针 + MDA 检测试剂盒 + 铁离子检测 + Western blot + 形态学

其中，MDA 检测 / 丙二醛含量测定承担的是“脂质过氧化终末产物这一环”的证据，不是说一盒试剂就能把铁死亡这件事概括完。

把 MDA 放回“氧化应激整条链”里看，会比单独看一个数更有感觉，后面想设计整套 SOD、GSH、MDA、T-AOC、ROS 这些指标时，可以配合《氧化应激指标怎么搭？MDA 在氧化应激的应用》一起考虑。

二、检测原理：丙二醛含量测定最常见的套路是什么？

1. TBA/TBARS 比色法：绝大多数试剂盒的“老底”

目前市面上大部分丙二醛试剂盒 / MDA检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒，用的都是同一条底层路线——TBA（硫代巴比妥酸）法 / TBARS 检测。

思路大概是：

1. 在酸性、高温条件下，让样本中的 MDA 与 TBA 发生缩合反应；
2. 生成一种带颜色的 MDA–TBA 复合物；
3. 这个复合物在可见光区有吸收峰，经典是532 nm；
4. 有些体系再加一个背景波长（比如 600 nm），用 A₅₃₂ − A₆₀₀ 这样的差值，把背景扣掉。

也就是说：

丙二醛含量测定 = 先把 MDA 变成好测的有色产物，再用吸光度反推出含量。

2. 不同产品的差别：原理相似，表达方式不同

在这条原理之上，各家会做一些“工程化”的优化：

• 有的做成传统试管法，用分光光度计读数；
• 有的做成 96 孔板微量比色，用酶标仪一次读几十个样本；
• 少部分会用荧光法、HPLC / LC-MS 等更“重”的平台。

名字上可能写成：

• Micro Lipid Peroxidation (MDA) Assay kit
• 丙二醛试剂盒
• 脂质过氧化（丙二醛）含量检测试剂盒（微量法）
• MDA检测试剂盒
• 脂质过氧化检测试剂盒

本质都是围绕TBA 比色 + MDA 终末产物 这一套在做，只是呈现形式不同。

三、常见方案怎么选：看原理和格式，不被名字绕进去

市面上试剂盒名字五花八门：丙二醛试剂盒、MDA 检测试剂盒、脂质过氧化检测试剂盒……

从实验的角度，真正有意义的区别其实在于**“怎么做”**，而不是名字怎么叫。

可以按**“原理 + 操作形式”** 大致分三类方案：

1. 传统 TBARS 方案：自配试剂 + 分光光度计

• 使用者自己配酸性体系和 TBA 溶液；
• 在玻璃试管或离心管中加样反应；
• 高温孵育后，用分光光度计在 532 nm 一类波长读数；
• 最后根据标准曲线或公式计算 MDA 含量。

特点：

• 可调参数多，灵活；
• 步骤也多，对个人操作习惯要求高，重现性更依赖经验。

适合：

有一定方法学基础、想自己掌控每个条件的实验室。

2. 微量比色法 MDA 检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒（96 孔板）

• 厂家已经配好反应工作液（Reaction Mix）；
• 实验时按说明书加样、孵育、离心、上 96 孔板；
• 用酶标仪在 532 nm / 600 nm 等波长同时读取多个样本的吸光度；
• 再按说明书给出的公式，把 ΔA 换算成 MDA 含量。

特点：

• 条件标准化，新手也能比较快上手；
• 适合高通量：几十个样本 + 多个复孔，一板子搞定；
• 很适合动物实验 + 细胞实验 + 体液样本一起跑的课题组。

适合：

日常科研使用频率高、样本量多、需要重复和 panel 的课题。

3. HPLC / LC-MS 等高阶丙二醛含量测定

• 先用 HPLC 或 LC-MS 分离、检测 MDA 或相关衍生物；
• 特异性和分辨率更好，可以同时看更多脂质过氧化产物。

特点：

• 对仪器平台和方法开发要求高；
• 更偏向方法学 / 代谢组学 / 药代方向。

适合：

已经有大仪平台、且课题本身就偏方法学或代谢物 profiling 的团队。

对大多数常规氧化应激课题来说，这一类不是“首选日常工具”。

换句话说：“丙二醛试剂盒 / MDA检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒”这些名字本身，不是关键的技术分界线。真正需要考虑的是：你想要哪一种原理和操作形式，适不适合你现在的样本和仪器条件。

四、通用实验流程：给所有 MDA 检测搭一个“骨架”

不同品牌的说明书，在体积、时间上会有差别，但流程骨架其实非常接近。

下面这套“通用版”，可以当作你脑子里的流程图，看任何 MDA检测试剂盒说明书时都能对上号。

1. 样本准备：决定上限的一步

常见样本类型：

• 动物 / 植物组织
• 细胞（贴壁或悬浮）
• 细菌
• 血清、血浆、尿液等体液

通用原则：

• 尽量使用新鲜样本，不能马上测时，分装后 −80℃ 保存，减少冻融；
• 前处理全程放在冰上操作，尽量减少额外氧化；
• 按说明书推荐的比例配匀浆液或裂解液（例如：多少克组织 / 多少 mL 缓冲液；多少个细胞 / 多少 μL 裂解液）。

样本大致会经历几步：

• 组织：剪碎 → 加预冷匀浆液 → 冰浴匀浆 → 低温离心 → 取上清；
• 细胞：PBS 洗涤 → 加裂解液冰浴裂解 → 低温离心 → 取上清；
• 细菌：PBS 洗 → 加缓冲液超声破碎 → 低温离心 → 取上清；
• 血清 / 血浆 / 尿液：离心去杂质后，可直接或按说明书适度稀释上样。

如果后面还要用蛋白量做归一化（nmol/mg prot），这一阶段顺手做个 BCA 会更方便。

样本这一步做得粗糙，后面再好的 MDA 检测试剂盒也救不回来，想细看不同样本在取材、匀浆、冻存上有哪些坑，可以对照《样本前处理与保存对 MDA 检测的影响（操作细节向）》那篇一步步优化。

2. 搭反应体系：样本孔 + 空白孔

大部分微量比色MDA检测试剂盒 / 丙二醛试剂盒 的做法类似：

• 测定孔：反应工作液（Reaction Mix） + 样本上清；
• 空白孔：反应工作液 + 水 / 空白缓冲液。

要点只有两个：

1. 样本体积照说明书来，不要为了“多一点信号”随便加量；
2. 正式大批量实验前，用 2–3 份样本做个稀释梯度，找一个落在线性范围中段的条件。

3. 高温孵育、冷却和离心

典型步骤：

1. 在酸性条件下，高温水浴或金属浴孵育固定时间（比如 90–100℃、若干分钟），让 MDA 与 TBA 充分缩合；
2. 反应结束后，立即冰浴冷却，终止反应；
3. 室温或低温离心，把沉淀甩下来，取上清用于比色。

这一段对“时间”和“温度”的统一非常敏感，也是很多重复性问题的来源。 简单说：一批样本尽量一口气走完，不要一半在锅里、一半在桌上聊天。

4. 上板读数：532 / 600 nm 双波长

对于 96 孔微量比色方案：

• 将上清转移到透明 96 孔板中；
• 用酶标仪设置两个波长：
• 主波长：532 nm（信号）；
• 参考波长：600 nm（背景）。

读出以后，一般会做这两步：

1. 对每个孔：
• 计算 ΔA = A₅₃₂ − A₆₀₀；
2. 再对每个样本：
• 做“样本孔 ΔA − 空白孔 ΔA”，得到 ΔΔA，用来计算丙二醛含量。

5. 结果计算和常见单位

不同试剂盒的公式写法不一样，但思路都差不多：丙二醛含量 = 常数 × ΔΔA × 稀释倍数 ÷ 样本量 / 蛋白量。

常用单位大致有四种：

• 组织：nmol/g 组织（最直观），有时会加一个nmol/mg prot；
• 血清 / 血浆 / 尿液：nmol/mL；
• 细胞 / 细菌：nmol/10⁴ cells（或 10⁶ cells）或nmol/mg prot。

通常的经验是：

• 终点组织：用 nmol/g 组织，更符合直觉；
• 体液：用 nmol/mL，方便组间比较；
• 细胞 / 细菌：如果有蛋白浓度，用 nmol/mg prot 更利于和其他生化指标统一口径。

如果在换算 nmol/g、nmol/mL、nmol/mg prot 这些单位时还是容易卡住，可以配合《丙二醛 MDA 含量检测结果怎么计算？4 种常见单位和公式讲透》一起看，把公式结构和单位选择一步捋清楚。

五、怎么用：动物实验、细胞实验和铁死亡里，MDA 放在哪？

1. 动物模型：从“终点”到“机制”的桥梁

常见的动物模型，比如：

• 高脂饮食、ApoE-/- 动脉粥样硬化；
• 糖尿病及其心、肾、神经并发症；
• 药物性肝损伤、肾损伤；
• 心肌 / 脑缺血再灌注等。

在这些实验里，MDA 经常这样用：

• 和 SOD、GSH、CAT、T-AOC 这些一起，作为一组氧化应激 + 抗氧化指征；
• 和 HE 染色、免疫组化、TUNEL 等配合，说明“组织结构变坏”和“脂质过氧化加重”是同一条线上的事情；
• 作为药物 / 干预减轻脂质过氧化损伤的量化依据。

写结果的时候，可以这样组织语言：

模型组丙二醛（MDA）含量显著升高，提示脂质过氧化损伤明显；
干预组 MDA 水平降低，同时 SOD 活性升高、GSH 含量回升，说明该干预能够减轻氧化应激和脂质过氧化。

2. 细胞实验：验证机制、补充体内结果

在细胞实验中，MDA 主要承担两个作用：

• 作为“脂质过氧化终末产物”的 readout，验证某处理是否真的加重/缓解了脂质过氧化；
• 和 ROS、线粒体膜电位、炎症因子、凋亡 / 坏死等指标一起，补全机制链条。

做 ferroptosis 的细胞模型时，经常会有一套组合：

• 细胞活力（CCK-8 / MTT）；
• 脂质 ROS（C11-BODIPY）；
• MDA 检测（MDA检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒）；
• 铁离子含量；
• GPX4、SLC7A11、ACSL4 等蛋白；
• 线粒体形态。

这样一来，MDA 就很自然地成为铁死亡证据链中“脂质过氧化终末产物”的一部分。

如果课题重点在 ferroptosis 或细胞水平的脂质过氧化，可以配合《细胞实验和铁死亡研究中，怎么用好 MDA 指标？》一起看，会更清楚 MDA 在整条铁死亡证据链里负责哪一块。

3. 血清 / 尿液：做系统氧化应激的“快照”

长期给药、慢性疾病模型中，也会使用血清 / 尿液做：

• 丙二醛含量测定（MDA）；
• SOD 活性、GSH 含量、T-AOC 等；
• 配合炎症因子、代谢指标，观察整体状态的变化。

这里 MDA 更像是一张“整体氧化压力”的快照，

和组织层面的 MDA 一起看，可以对照“局部 + 全身”的差别。

真正上文章时，一般不会只报 MDA，而是把 MDA 放进一整套氧化应激 panel 里一起看，具体怎么搭配 SOD、GSH、T-AOC、ROS 这些指标，可以接着看《氧化应激指标怎么搭？MDA 在氧化应激的应用》。

六、结果怎么写：不是单独报一个 MDA 数字就完事

很多人做完 MDA检测，Excel 里躺着一列数字，卡在“这玩意儿怎么写进文章”。

一个比较实用的思路是：

1. 先看方向
• 模型组 MDA 是否显著高于对照组？
• 干预组是否能把 MDA 拉回去？
2. 再看组合
• MDA 和 SOD、GSH、ROS、组织病理这些放在一起，故事是不是连得起来？
• 如果是铁死亡课题：铁负荷、MDA、脂质 ROS、GPX4 / SLC7A11 等指标能不能共同支撑“脂质过氧化失控 + 防线崩溃”这一条线？
3. 最后看图形呈现
• 终点指标可以做柱状图，清楚展示组间差异；
• 时间过程实验可以做折线图，展示随时间的趋势；
• 如果是 panel，可以把 MDA 和其他指标排在一张图里，让审稿人一眼看懂整个氧化应激状态的变化。

七、试剂盒怎么选：关键不在“名字”，在适不适合你的实验

当你在网上搜这些关键词的时候：

丙二醛含量测定 / 丙二醛试剂盒 / MDA检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒 / 铁死亡检测试剂盒……

真正要回答的，其实是几件很具体的事情。

1. 我要测哪些样本？

先问自己：

• 只做动物组织？
• 还是会同时测血清、血浆、尿液？
• 后面会不会加细胞、细菌实验？

如果样本类型比较多，选那种一套体系兼容组织 + 体液 + 细胞 + 细菌的微量比色MDA 检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒，可以省掉后面换体系的麻烦。

2. 我的仪器配置是什么样？

• 有酶标仪：
• 96 孔板微量比色是最省心的选择；
• 只有分光光度计：
• 可以考虑支持比色皿读数的方案，或者传统 TBARS 形式的丙二醛试剂盒；
• 有 HPLC / LC-MS 平台，且课题本身偏方法学：
• 可以考虑高阶丙二醛含量测定方式，但那就是另一条路了。

3. 说明书好不好用？

说明书里几件事越清楚，实验翻车的概率就越小：

• 不同样本（组织、细胞、体液）前处理有没有写清楚；
• 反应体系、孵育条件、读数波长是不是明确；
• 丙二醛含量测定的计算公式、单位示例有没有完整给出；
• 有没有提醒 ΔA / ΔΔA 的合理范围（比如太高需要稀释、太低需要加样本量）；
• 是否明确用途：科研用，不用于临床诊断。

一句话：先看说明书，再看价格和货期。

上面是总的选型思路，如果你正准备具体换一批或新上 MDA 试剂盒，可以对照《MDA 丙二醛含量测定试剂盒怎么选？TBARS、微量比色和 HPLC 一次说透》那篇，把原理、格式、线性范围和批次问题都提前想清楚。

八、常见问题：MDA 结果怪怪的，可以先自查这些

1. 整体信号很低：ΔΔA 几乎贴着 0

可能情况：

• 模型本身脂质过氧化不明显；
• 上样量太少或稀释过度；
• 高温孵育时间太短、温度偏低；
• 样本匀浆 / 裂解不充分。

自查方向：

• 适度增加上样量，或减少稀释倍数再试一次；
• 做个小型时间 / 温度预实验，确保反应充分；
• 检查匀浆、超声、裂解是否到位。

2. 信号超高：怀疑超出线性范围

表现：

• ΔΔA 很大，甚至出现“样本越浓，吸光度变化反而不明显”。

自查方向：

• 做 2–3 个倍数稀释，看吸光度是否与浓度呈线性关系；
• 正式实验选在线性区间中段的稀释度，结果再乘以稀释倍数。

3. 空白孔吸光度偏高

可能原因：

• 反应体系本身背景略高；
• 板底有水滴、指纹、灰尘或小气泡；
• 空白孔和样本孔操作时有轻微交叉污染。

解决方法：

• 上板前轻轻敲几下，赶走气泡；
• 读板前看看板底是否干净；
• 操作时空白孔和样本孔尽量分区清楚。

4. 组内差异大：同一组 CV 特别高

可能方向：

• 样本前处理条件不统一（匀浆时间、离心条件有差异）；
• 多道枪没校准，移液误差大；
• 水浴 / 金属浴孵育时，起止时间掌握不一致。

简单原则：

MDA 脂质过氧化检测对“手”比较敏感。试剂盒帮你标准化的是体系，剩下的就看操作习惯。

这里是一个简化版总览，想按“现象 → 可能原因 → 排查顺序”更系统地查，可以直接对照《MDA丙二醛检测常见问题与排查（故障指南）》那篇做一步步排查。

九、小结：把 MDA 放在一个“对的位置”上

看完一大圈，最后落回几个关键点：

1. MDA = 丙二醛，是脂质过氧化的经典终末产物之一。

   丙二醛含量测定 / MDA检测 / 丙二醛试剂盒 / MDA检测试剂盒，本质都是围绕这一件事。

2. 脂质过氧化检测试剂盒，只是从“过程”这个角度给它起了一个名字，

   实际上也是通过 MDA 这样的终末产物，来反映脂质过氧化程度。

3. 真正有意义的技术差别，在于：

• 用的是 TBA 比色法，还是荧光 / HPLC / LC-MS；

• 是传统试管 + 分光光度计，还是 96 孔板微量比色。

  名字像不像高大上，其实不重要。

4. 在氧化应激和铁死亡课题里，

   MDA 永远不是一个孤零零的数字，

   而是和 SOD、GSH、ROS、铁负荷、GPX4 等指标一起，

   组成一条完整的“氧化应激 → 脂质过氧化 → 功能损伤 / 铁死亡”的证据链。

如果你已经有一款稳定好用的微量比色MDA 检测试剂盒 / 脂质过氧化检测试剂盒，

接下来要做的，就是在你的课题里想清楚：

把 MDA 指标放在整套设计的哪一环，
它应该和谁“搭班子”，
最后在文章里，要帮你说哪一句“关键信息”。

这样，MDA 才不只是方案里的一行“常规指标”，而是能真正撑起一部分机制故事的“关键证据”。