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细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™

ExKine™ Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit

产品货号
KTP3001

产品特点:

  • 多用途:兼容新鲜哺乳动物细胞或组织,核-浆蛋白交叉污染极低。
  • 方便快捷:全程<2小时,非变性提取,保持蛋白天然活性。
  • 兼容性好:提取产物可直接用于Western Blot、EMSA、报告基因、酶活测定等多种下游实验。
  • 选择规格

    50 T
    ¥498
    现货(当天发货)
    200 T
    ¥1098
    现货(当天发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    ExKine™ 细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒(ExKine™ Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit,货号 KTP3001)是一款专为哺乳动物细胞或组织设计的快速分离工具,可在非变性条件下,于2小时内同时获得高纯度、高活性的细胞核蛋白胞浆蛋白,为下游功能研究提供可靠原料。

    背景知识

    细胞核与胞浆是细胞功能研究的两大核心区域。细胞核蛋白不仅决定基因表达调控,还参与信号转导、染色质重塑等关键生命活动;胞浆蛋白则主导代谢、信号级联及蛋白合成。传统分步提取常伴随交叉污染或耗时冗长,而ExKine™通过优化的缓冲体系与分级裂解策略,可在低温(2-8 °C)下实现核-浆高效分离,所得蛋白可直接用于EMSA(凝胶迁移实验)Western Blot转录因子活性检测酶学分析等实验。

    应用领域

    适用于细胞生物学转录调控研究信号通路分析药物靶点验证等场景,特别适合需要高纯度核蛋白胞浆蛋白的实验平台。

    细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™

    产品参数

    中文名称 细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™
    英文名称 ExKine™ Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
    产品货号 KTP3001
    试剂盒组分 • 细胞浆蛋白溶液A (CES A)
    • 细胞浆蛋白溶液B (CES B)
    • 核提取溶液 (NES)
    • DTT (500X)
    • 蛋白酶抑制剂 (100X)
    注意事项 所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备,并确保所有溶液都是解冻和均匀的。
    保存建议 -20℃保存 12 个月
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    Working Cytoplasmic Solution A (Working CESA):使用前,立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×)和 2 µL DTT(500×)到 1 mL CESA中,置于冰上;4℃保存。

    Cytoplasmic Solution B (CESB):即用型;使用前,置于冰上;4℃保存。

    Working Nuclear Extraction Solution (Working NES):使用前,立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×)和 2 µL DTT (500×)到 1 mL NES中,置于冰上;4℃保存。

    DTT (500×):即用型;使用前,置于冰上;-20℃保存。用不完的试剂-20℃分装保存,避免反复冻融。

    Protease Inhibitor (100×):即用型;使用前,置于冰上;-20℃保存。用不完的试剂-20℃分装保存,避免反复冻融。

    实验步骤

    注意:所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

    I 细胞培养物的制备
    1. 对于贴壁细胞,用细胞刮刀收获 2×106个细胞,然后 500 g离心 5 min。对于悬浮细胞,500 g离心 5 min。
    2. 用预冷的 PBS重悬细胞沉淀,500 g离心 2-3 min,弃上清。
    3. 注意:使用移液器小心吸取上清,使细胞沉淀尽可能干燥。

    4. 向细胞沉淀中加入 200 µL预冷的Working CESA后,继续步骤 III。
    II 组织制备
    1. 将 30-60 mg组织切成小块,放入离心管中。
    2. 用预冷的 PBS清洗组织,500 g离心 5 min,弃上清。
    3. 注意:使用移液器小心吸取上清,使细胞组织尽可能干燥。

    4. 用 200 µL预冷的Working CESA重悬组织。
    5. 使用匀浆器匀浆组织,直至超过 90%的细胞被破坏,细胞核在显微镜下可见,继续步骤 III。
    III 胞浆蛋白和核蛋白提取
    1. 用涡旋仪(最高设置)剧烈涡旋样本管 5 s,使细胞完全悬浮。离心管在冰上孵育 15 min,使细胞膨胀。
    2. 加入 10 µL冰冷的 CESB到离心管中,设置最高时速,涡旋 5 s,在冰上孵育 1-2 min。
    3. 16,000 g,4℃离心 5 min。
    4. 立即将上清液(胞浆蛋白提取物)转移到干净的预冷离心管中,置于冰上待测或在-80℃下长期保存。沉淀(含有细胞核)通常是粘性的并且是非常紧凑。
    5. 可选步骤:为了从细胞核中去除残留的胞浆蛋白,用额外的预冷Working CESA或 PBS重悬沉淀,然后重复步骤 III的 3和 4步骤 1-2遍。

    6. 加入 100 µL预冷的Working NES重悬沉淀后,置于冰上,每隔 3-5 min涡旋 15 s,持续 30 min。避免泡沫形成。
    7. 注意:如果沉淀有分散不开的情况,可剪断吸头后用吸头反复吹打。

    8. 16,000 g,4℃离心 15 min。
    9. 分装上清液(核蛋白)到预冷的离心管,取出一小份用于蛋白定量检测。将其它装有核蛋白的离心管保存在-80℃。避免反复冻融。
    10. 注意:根据该实验步骤提取的核蛋白中含 NES(一种高盐缓冲液)。如果在随后的应用中需要大量的核提取物或者如果下游检测出现问题,可透析核蛋白以除去高盐物质。

    注意事项

    问题可能的原因解决办法
    胞浆蛋白浓度低裂解或提取缓冲液的体积和细胞数量不匹配进行细胞计数,并使用合适体积的缓冲液
    细胞沉淀未分散充分涡旋
    细胞未裂解增加 CESB 用量
    核蛋白浓度低细胞沉淀未分散充分涡旋
    细胞核分离不完全加入 CESB后,增加离心时间
    使用自己配制的裂解或提取缓冲液使用该试剂盒中提供的裂解或提取缓冲液
    胞浆蛋白和核蛋白未完全分离细胞裂解不充分增加涡旋时间,以充分分散细胞沉淀
    增加 CESB用量增加 CESB用量
    胞浆蛋白未完全移除在细胞核裂解之前,小心操作,移除胞浆蛋白

    常见问题

    Q: 该试剂盒可以分别提取细胞核蛋白和胞浆蛋白吗?

    A: 可以。

    Q: 该试剂盒使用过程中有哪些注意事项?

    A: 1、使用新鲜样本;2、离心时选用合适的离心力;3、取出及抽吸EP管的动作应轻柔,从大规格枪头切换成小规格枪头,吸上层液体用大规格枪头,下层液体用小规格枪头。

    Q: 该细胞核提取试剂盒如果在下层沉淀中未检测到细胞核,而是细胞杂质,可能是什么原因?

    A: 可能有以下三个方面原因:1. 细胞裂解不充分,导致细胞核未进入提取液中;2. 选用的离心机型号不匹配,未达到细胞核和细胞质分离的离心力;3. 操作人员动作不轻柔,EP管取放过程中有振荡,导致分层的组分重新混合在一起。

    Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在,可能是什么原因?应如何避免?

    A: 小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物,建议客户纯化过程低温下进行,同时样本采用新鲜样本,同时纯化过程尽量在4度进行,去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 预装柱填料中是否含内毒素?

    A: 本公司的纯化填料中含有微量内毒素,如果客户样品对内毒素有要求,建议用曲拉通将内毒素萃取出来,。

    Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带,是什么原因?应如何解决?

    A: 如果低分子量条带在原液中不存在,说明是在纯化过程中,靶蛋白出现降解,建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些,但是上样和洗脱的速度尽量不加快。

    文献引用

    Repurposing of epalrestat for neuroprotection in parkinson’s disease via activation of the KEAP1/Nrf2 pathway.

    杂志名称: Journal of Neuroinflammation | 作者: Jia, Huafang, et al.

    IF: 10.100 | 发表时间: 2025

    FKBP10 Promotes the Muscle Invasion of Bladder Cancer via Lamin A Dysregulation.

    杂志名称: International Journal of Biological Sciences | 作者: Zhao, Xupeng, et al.

    IF: 10.000 | 发表时间: 2025

    The involvement of IRP2-induced ferroptosis through the p53-SLC7A11-ALOX12 pathway in Parkinson's disease.

    杂志名称: Free Radical Biology and Medicine | 作者: Yao, Zhengyang, et al.

    IF: 7 | 发表时间: 2024

    Targeting Parkin-regulated metabolomic change in cartilage in the treatment of osteoarthritis.

    杂志名称: Iscience | 作者: Ma, Yiyang, et al.

    IF: 5 | 发表时间: 2024

    Photobiomodulation Using 830 nm Lighting‐Emitting Diode Inhibits Melanogenesis via FOXO3a in Human Melanocyte.

    杂志名称: Pigment Cell & Melanoma Research | 作者: Dan, Yanjun, et al.

    IF: 4 | 发表时间: 2024

    The autophagic regulation of rosiglitazone-promoted adipocyte browning.

    杂志名称: Frontiers in Pharmacology | 作者: Li, Yue, et al.

    IF: 4 | 发表时间: 2024

    Impaired Mitochondrial Biogenesis Inhibits Epithelial-Mesenchymal Transition in Villi of PCOS Patients.

    杂志名称: Endocrinology | 作者: Jie, Hui-Ying, et al.

    IF: 3.300 | 发表时间: 2025

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