超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1030
Price: 526 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Superoxide Dismutases (SOD) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1030

产品特点：

微量体系：仅需20 μL样本，适配96孔高通量检测，节省珍贵样品。

高特异性：WST-8法直接检测O₂⁻，避免邻苯三酚自氧化法的非特异干扰。

宽动态范围：线性区间覆盖0.1–200 U/mL，适用于细胞裂解液、动植物组织匀浆、血清/血浆等。

即用型组分：包含裂解缓冲液（5×）、WST-8、Enhancer及酶反应体系，无需额外配制。

兼容性强：不受酚红、10%以内血清或常见缓冲盐影响，适合常规细胞培养体系。

选择规格

48 T/48 S

¥526

现货（当天发货）

96 T/96 S

¥698

现货（当天发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于WST-8显色反应的微量比色试剂盒，可在96孔板中快速、定量地测定细胞、组织及多种生物体液中的SOD酶活性，为细胞代谢与氧化应激研究提供可靠工具。

超氧化物歧化酶（SOD，EC 1.15.1.1）是清除超氧阴离子自由基（O₂⁻）的关键抗氧化酶，催化其歧化为O₂与H₂O₂。SOD活性异常与肌萎缩侧索硬化、神经退行性疾病、癌症及围产期致死等病理过程密切相关。人体存在三种亚型：胞质Cu/Zn-SOD（SOD1）、线粒体Mn-SOD（SOD2）和胞外Cu/Zn-SOD（SOD3）。

本试剂盒采用改良WST-8法：黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系产生O₂⁻，WST-8被O₂⁻还原生成水溶性甲臜（橙色，450 nm）。SOD通过竞争性抑制WST-8还原，其活性与450 nm处吸光度下降呈线性关系，最大抑制率接近100%，且对常见干扰物（如酚红、血清蛋白）耐受性良好。

应用领域

• 细胞代谢研究：监测氧化应激模型（如H₂O₂、药物处理）中SOD活性变化。
• 疾病机制探索：评估神经退行性疾病、肿瘤或衰老模型中的抗氧化防御状态。
• 药物筛选：高通量评价抗氧化剂或候选药物对SOD活性的调节作用。
• 植物抗逆研究：分析干旱、盐胁迫等条件下植物组织的抗氧化响应。

产品参数

中文名称	超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Superoxide Dismutases (SOD) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1030
检测类型	氧化应激
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Assay Buffer •Sample Diluent •Lysis Buffer (5×) •WST-8 •Enhancer •Xanthine Oxidase •Xanthine
分子	SOD
检测指标	SOD
注意事项	• 开盖前，以低速简单地离心。 •实验前，将所有试剂恢复到室温（25°C）。黄嘌呤试剂可能看起来混浊。使用前请先涡旋。 •如果未立即检测，样品可以在-80°C下储存。
保存建议	收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计（能测 450 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅，离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

注意：各组分开盖前，请先低速离心。

Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Sample Diluent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

1×Lysis Buffer：使用前，平衡到室温，Lysis Buffer (5×)用去离子水稀释至 1×Lysis Buffer，4℃保存。

WST-8：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装避光保存于-20℃。

Enhancer：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装避光保存于-20℃。

注意：Enhancer正常为紫红色溶液，如遇发黄，请与 Abbkine工作人员联系。

Xanthine：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装保存于-20℃。如果该组分出现浑浊，使用前请短暂涡旋。

Working Xanthine Oxidase：Xanthine Oxidase 分装保存于-20℃；用 Sample Diluent 将 Xanthine Oxidase 1:20 的稀释的到 Working Xanthine Oxidase，临用前配制，整个实验过程中，冰上避光放置。

Working Reagent：临用前配制；每孔吸取 148 µL Assay Buffer，10 µL Xanthine, 5 µL WST-8, 1 µL Enhancer，混匀后待用。

样本制备

1. 动物组织样本：称取 0.1 g组织加入 1 mL预冷的 1×Lysis Buffer将样本进行匀浆。匀浆后的样本，4℃, 12,000 g离心 5 min，取上清进行检测。

2. 细胞样本：收集 5×10⁶个细胞，用预冷的 PBS洗细胞，800 g离心 2 min，弃上清。加入 1 mL预冷的 1×Lysis Buffer进行超声波破碎。超声波破碎 3 min（功率 30%或 300 W，超声 3 s，间隔 7 s），4℃，12,000 g离心 5 min后，取上清进行检测。

注意：如果需要分别检测胞浆和线粒体的 SOD活性，组织/细胞样本的制备，请参考Mattiazzi et al (2002). JBC 277:29626-33。

3. 血清、血浆样本：按常规方法收集血清，Sample Diluent稀释后即可作为血清样本进行检测；用抗凝管收集血液，颠倒混匀。4℃，600 g离心 10 min，移取上清至另一新的离心管中，适量 Sample Diluent稀释后即可作为血浆样本进行检测。

4. 植物样本：称取 0.1 g新鲜植物样本，加入 1 mL预冷的 1×Lysis Buffer进行超声波破碎。超声波破碎 3 min（功率 30%或 300 W，超声 3 s，间隔 7 s），4℃，12,000 g离心 5 min后，取上清进行检测。

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。处理好的样本须当天检测。测定过程中样本在冰上放置，以免变性和失活。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 450 nm，可见分光光度计用去离子水调零。

2. 测定前将Working Reagent在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）孵育 5 min以上。

3. 在 96孔板或微量玻璃比色皿中按照如下方式加样：

试剂	样本孔（µL）	样本对照孔（µL）	空白孔（µL）	空白对照孔（µL）
Xanthine	1.3	1.3	1.3×2	-
样本	20	20	0	0
Working Xanthine Oxidase	40	0	40	0
Sample Diluent	0	40	20	60
Working Reagent	164	164	164	164

4. 充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）孵育 30 min后，450 nm处测定各孔吸光值 A。计算ΔA 样本=A 样本-A 样本对照，ΔA 空白=A 空白-A 空白对照。

注意：空白孔和空白对照孔只需各做 2-3孔；不同背景颜色的样本需要各设置一个对照孔，去除样本本身的背景色。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 抑制百分率的计算

抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 样本) ÷ΔA 空白×100%

注意：尽量使样本的抑制百分率在 10-90%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 10%或大于 90%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用 Sample Diluent适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2. SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。

3. SOD酶活性计算：

(1) 血清（浆）SOD活力计算：

SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷V 样×n=11.2×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×n

(2) 组织和细胞 SOD 活力计算：

a. 按样本蛋白浓度计算

SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)×n=11.2×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×n

b. 按样本鲜重计算

SOD活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)×n=11.2×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×n

c. 按细胞数量计算

SOD活性(U/10⁴ cells)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)×n=0.0224×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×n

V 反总：反应体系总体积，0.224 mL；W：样本质量，g；V 样：加入反应体系中样本体积，0.02 mL；V 样总：加入 1×Lysis Buffer体积，1 mL；n：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞总数，500万。

常见问题

Q: 如果想同时测定SOD、MDA和BCA，可以使用PBS对小鼠小肠进行匀浆，不加裂解液吗

A: 可以的，使用匀浆器匀浆组织样品，新鲜制备立即检测

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。