人甲胎蛋白(AFP)ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 人甲胎蛋白(AFP)ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE6037
Price: 1269 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA Kit

产品货号

KTE6037

产品特点：

高灵敏度：检测下限低至 0.313 ng/mL，可识别微量 AFP 变化

优良特异性：与 AFP 类似物无明显交叉反应，结果可靠

即用型组分：包含冻干标准品、浓缩缓冲液及 HRP 底物，实验流程简洁

灵活样本：兼容血清、血浆及细胞培养上清，满足不同研究需求

严格质控：提供 20× 洗液与封板膜，减少操作误差

选择规格

48 T

¥1269

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96 T

¥1869

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒是一款基于竞争法原理设计的高灵敏度酶联免疫检测工具，可在血清、血浆及细胞培养上清中对人源甲胎蛋白（AFP）进行准确定量。

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的高特异性和高灵敏度肿瘤标志物，其临床 Cutoff 值通常设定为 20 μg/L；当血清浓度持续高于 500 μg/L 或呈进行性升高时，提示具有更高的诊断价值。EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒采用竞争法：微孔板预先包被特异性抗体，样本中的 AFP 与 HRP 标记的 AFP 竞争结合抗体位点；经 TMB 显色后，450 nm 处吸光度与样本中 AFP 浓度呈负相关，从而实现 0.625–40 ng/mL 范围内的精确定量。

应用领域

本试剂盒适用于肿瘤标志物研究、肝癌早期筛查、细胞分泌功能分析及药物干预效果评估等方向，为临床前研究及基础科研提供可靠的 AFP 定量数据。

产品参数

中文名称	人甲胎蛋白(AFP)ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA Kit
产品货号	KTE6037
反应性	人
检测方法	竞争法
样本类型	血清#血浆#细胞培养上清
试剂盒组分	• Human AFP Microplate • Human AFP Standard (lyophilized) • Sample Diluent (5×) • Assay Buffer (5×) • HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody (100×) • HRP Substrate（TMB） • Stop Solution • Wash Buffer (20×) • Plate Covers
检测范围	0.625-40 ng/mL
灵敏度	0.313 ng/mL
检测指标	AFP
注意事项	• 1. 如果 Sample Diluent (5×)和 Assay Buffer (5×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。 • 2. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 3. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 4. 为确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附板贴。 • 5. Stop Solution 有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。
保存建议	按各组分标签提示分开存储，保质期12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm 处的吸光度）
多通道移液器、自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm 处的吸光度）

多通道移液器、自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5:1 的比例稀释 5× Sample Diluent 得到 1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Sample Diluent 用于稀释标准品，血清和血浆样品。

1× Sample Diluent：

1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5:1 的比例稀释 5× Assay Buffer 得到 1× Assay Buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Assay Buffer 用于稀释 HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody (100×)。

1× Assay Buffer：

Human AFP Standard：加入 1 mL 1× Sample Diluent 复溶 Human AFP Standard 得到 40 ng/mL 标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min 并轻轻晃动。

Human AFP Standard：

1× HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay Buffer 对 HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的抗体应在稀释后 30 min 内使用。

1× HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody：

HRP Substrate TMB（）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 避光保存。

HRP Substrate TMB（）：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 保存。

Stop Solution：

1× Wash Buffer：使用前平衡到室温，用去离子水稀释 20 倍，得到 1× Wash Buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30 天。

1× Wash Buffer：

标准曲线设置

按下表所示，用 1× Sample Diluent 将 Human AFP 标准品稀释为 40、20、10、5、2.5、1.25、0.625 和 0 ng/mL 的标准品。

序号	标准品体积	1× Sample Diluent (× 体积 μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	1,000 µL of 4 ng/mL	0	40
Std.2	500 µL of Std.1 (4 ng/mL)	500	20
Std.3	500 µL of Std.2 (2 ng/mL)	500	10
Std.4	500 µL of Std.3 (10 ng/mL)	500	5
Std.5	500 µL of Std.4 (5 ng/mL)	500	2.5
Std.6	500 µL of Std.5 (2.5 ng/mL)	500	1.25
Std.7	500 µL of Std.6 (1.25 ng/mL)	500	0.625
Std.8	0	500	0

序号标准品体积1× Sample Diluent (× 体积 μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积1× Sample Diluent (× 体积 μL)标准品浓度（ng/mL）Std.11,000 µL of 4 ng/mL040Std.11,000 µL of 4 ng/mL040Std.2500 µL of Std.1 (4 ng/mL)50020Std.2500 µL of Std.1 (4 ng/mL)50020Std.3500 µL of Std.2 (2 ng/mL)50010Std.3500 µL of Std.2 (2 ng/mL)50010Std.4500 µL of Std.3 (10 ng/mL)5005Std.4500 µL of Std.3 (10 ng/mL)5005Std.5500 µL of Std.4 (5 ng/mL)5002.5Std.5500 µL of Std.4 (5 ng/mL)5002.5Std.6500 µL of Std.5 (2.5 ng/mL)5001.25Std.6500 µL of Std.5 (2.5 ng/mL)5001.25Std.7500 µL of Std.6 (1.25 ng/mL)5000.625Std.7500 µL of Std.6 (1.25 ng/mL)5000.625Std.805000Std.805000

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒（1,000 g，15 min，20-30℃），立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

1. 细胞培养上清：

2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

2. 血清：

3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

3. 血浆：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

2. 每孔加入 100 μL 稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

3. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash Buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash Buffer。

4. 每孔加入 100 μL 1× HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。

5. 重复步骤 3 中的洗涤 3-5 次。

6. 每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB（）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。

7. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

8. 在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。

2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。

文献引用

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