土壤几丁质酶活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 土壤几丁质酶活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB4058
Price: 469 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Soil Chitinase Activity Assay Kit

产品货号

KTB4058

产品特点：

已验证样本类型齐全：土壤、动物组织、真菌培养物及液体样本均可直接检测

微量法设计，操作简便：仅需常规分光光度计，节省试剂与样本

4 ℃避光保存 6 个月，冰袋运输，实验安排更灵活

选择规格

48 T/24 S

¥469

现货（次日发货）

96 T/48 S

¥926

现货（次日发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的 CheKine™ 土壤几丁质酶活性检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro Soil Chitinase Activity Assay Kit）是一种基于微量比色法的检测系统，可在 540 nm 处通过棕红色产物的吸光度变化，快速评估土壤样本中几丁质酶的活性水平。

几丁质（Chitin）广泛分布于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物外壳、软体动物器官（如乌贼软骨）及真菌细胞壁中，是自然界含量仅次于纤维素的第二大生物多糖。几丁质酶（EC 3.2.1.14）能够催化几丁质水解，产生 N-乙酰-D-氨基葡萄糖（GlcNAc），在土壤生态系统中与真菌侵染防御、碳氮循环密切相关，已成为抗真菌病害研究的热点指标。

CheKine™ 土壤几丁质酶活性检测试剂盒（微量法）利用土壤几丁质酶水解底物几丁质后释放 GlcNAc，后者与 DNS 试剂反应生成棕红色化合物，在 540 nm 处呈现特征吸收峰。通过测定吸光值随时间的增加速率，即可定量反映样本中几丁质酶的活性。该体系适用于土壤、动物组织、真菌培养物及液体样本，为微生物生态、植物病理及环境科学领域提供可靠工具。

应用领域

土壤微生物生态学、植物-真菌互作研究、农业病害监测、环境碳氮循环评估、抗真菌机制探索等。

产品参数

中文名称	土壤几丁质酶活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Soil Chitinase Activity Assay Kit
产品货号	KTB4058
检测类型	水土检测
样本类型	土壤样本
试剂盒组分	• Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard
分子	土壤几丁质酶
检测指标	土壤几丁质酶
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	4℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测 540 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
恒温箱、制冰机、低温离心机、30-50目筛
去离子水、甲苯

试剂准备

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。Reagent II 为饱和溶液，使用前充分摇匀。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

注意：Reagent III 有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。

Standard：临用前配制；每瓶加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 5 mg/mL N-乙酰-D-氨基葡萄糖 Standard；使用前，平衡到室温。4℃避光保存 1个月。使用 5 mg/mL N-乙酰-D-氨基葡萄糖，按照下表所示，进一步稀释标准品：

序号	Standard体积（μL）	去离子水体积（μL）	浓度（mg/mL）
Std.1	80 μL of 5 mg/mL Standard	170	1.6
Std.2	70 μL of 5 mg/mL Standard	180	1.4
Std.3	60 μL of 5 mg/mL Standard	190	1.2
Std.4	50 μL of 5 mg/mL Standard	200	1.0
Std.5	40 μL of 5 mg/mL Standard	210	0.8
Std.6	30 μL of 5 mg/mL Standard	220	0.6
Std.7	20 μL of 5 mg/mL Standard	230	0.4
Std.8	7.5 μL of 5 mg/mL Standard	242.5	0.15

注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜土壤样本。土壤几丁质酶在虾塘蟹塘中活性较高。

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50目筛。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管进行）：

试剂	测定管	对照管	标准管	空白管
样本（g）	0.05	0.05	0	0
甲苯	10	10	0	0
混匀，25℃孵育 15 min。对照管沸水浴灭活 10 min，室温冷却。	-	-	0	0
ReagentⅠ（μL）	140	140	0	0
Reagent II（μL）	100	100	0	0
混匀，37℃孵育 24 h。沸水浴 5 min终止反应，室温冷却后 8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液。	-	-	0	0
上清液（μL）	175	175	0	0
Standard（μL）	0	0	175	0
去离子水（μL）	0	0	0	175
Reagent III（μL）	125	125	125	125

3. 混匀，95℃准确孵育 5 min，室温冷却后取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 540 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：（1）空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。（2）实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。（3）如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 1.6 mg/mL的ΔA 标准，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定代入方程得到 x (mg/mL)。

2. 土壤几丁质酶活性的计算：

单位的定义：37℃，每 g土壤每小时分解几丁质产生 1 mg N-乙酰-D-氨基葡萄糖定义为一个酶活力单位。

土壤几丁质酶(U/g 土壤)=(V 反总×x)÷W÷T=0.25x÷W

V 反总：反应体系总体积，0.25 mL；T：反应时间：24 h=1 d；W：样本质量，g。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。