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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 土壤外切β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶（S-C1）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于 3,5-二硝基水杨酸显色原理，专为土壤样本设计的微量酶活检测工具，可在 40-600 μg/mL（332-4,980 U/g 土壤）范围内快速、定量地测定 S-C1 活性。
外切β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶（C1，EC 3.2.1.91）是纤维素酶系的关键成员，广泛分布于细菌、真菌及动物体内，负责从多糖链非还原端依次水解并释放纤维二糖与葡萄糖。在土壤生态系统中，S-C1 活性直接反映微生物对植物残体纤维素的分解潜力。本试剂盒采用经典的 3,5-二硝基水杨酸法：S-C1 催化微晶纤维素降解产生还原糖，还原糖与 3,5-二硝基水杨酸共热后生成棕红色氨基化合物，其在 540 nm 处具有特征吸收峰；在一定时间内，540 nm 吸光度的增加速率与 S-C1 活性呈正比，从而实现土壤样本中该酶活的微量、快速测定。
适用于土壤微生物生态学、农业科学、环境科学等研究场景，用于评估土壤纤维素降解潜力、碳循环过程及微生物群落功能活性。
| 中文名称 | 土壤外切β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(S-C1)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Soil Exo-β-1,4-Glucanase (S-C1) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB4038 |
| 检测类型 | 水土检测 |
| 样本类型 | 土壤样本 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 检测范围 | 40-600 μg/mL (332-4,980 U/g 土壤) |
| 灵敏度 | 40 μg/mL (332 U/g 土壤) |
| 分子 | 土壤外切β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶（S-C1） |
| 检测指标 | 土壤外切β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶（S-C1） |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。Reagent I 浑浊或出现白色沉淀是正常现象，使用前摇晃数次混匀。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
注意：Reagent II 有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。
Standard：临用前配制；每瓶加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 10 mg/mL葡萄糖标准品；用不完的试剂 4℃保存 2周。使用 10 mg/mL 葡萄糖标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（μg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 60 μL of 10 mg/mL Standard | 940 | 600 |
| Std.2 | 600 μL of Std.1 (600 μg/mL) | 300 | 400 |
| Std.3 | 600 μL of Std.2 (400 μg/mL) | 600 | 200 |
| Std.4 | 600 μL of Std.3 (200 μg/mL) | 600 | 100 |
| Std.5 | 800 μL of Std.4 (100 μg/mL) | 200 | 80 |
| Std.6 | 500 μL of Std.5 (80 μg/mL) | 500 | 40 |
| Blank | 0 | 100 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜土壤样本。
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50目筛。称取约 0.1 g风干土样，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，室温震荡提取 30 min，然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） | 空白管（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 10 | 10 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 0 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 100 | 0 | 0 |
| 混匀，37℃准确反应 2 h。 | 0 | 0 | ||
| Standard | 0 | 0 | 110 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 0 | 0 | 110 |
| Reagent II | 200 | 200 | 200 | 200 |
3. 混匀，沸水浴 10 min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却至室温后 5,000 g，室温离心 5 min，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 540 nm处吸光值。空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 600 μg/mL的ΔA 标准，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (μg/mL)。
2. S-C1活性的计算：
酶活单位定义：37℃每克土样每分钟催化产生 1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-C1(U/g 土样)=x×V 反总÷V 样×V 样总÷W÷T=0.092x÷W
V 反总：酶促反应体积，0.11 mL；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 h=120 min； W：样本质量，g
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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