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谷氨酸脱羧酶(GAD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

CheKine™ Micro Glutamate Decarboxylase (GAD) Activity Assay Kit

产品货号
KTB3044

产品特点:

  • 微量法设计,节省珍贵样本,适配高通量实验需求
  • 基于经典berthelot反应,显色稳定,读数可靠
  • 包含7种即用型试剂组分,简化操作流程,缩短实验周期
  • 4℃避光保存6个月,冰袋运输,实验室常规条件即可稳定储存
  • 选择规格

    48 T/24 S
    ¥778
    现货(次日发货)
    96 T/48 S
    ¥1298
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    CheKine™ 谷氨酸脱羧酶(GAD)活性检测试剂盒(微量法)是一款基于比色法的微量检测工具,可在细胞代谢研究中对谷氨酸脱羧酶(GAD)活性进行快速、稳定的测定。该试剂盒专为细胞分析场景设计,适用于动物组织、血清或血浆等多种生物样本,帮助研究者精准评估GAD介导的γ-氨基丁酸(GABA)生成效率。

    谷氨酸脱羧酶(Glutamate Decarboxylase,GAD)是催化谷氨酸转化为抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的限速酶。GABA作为中枢神经系统中关键的抑制性神经递质,不仅参与神经信号调控,还被报道具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌及保肝利肾等多重生理作用,因此在医药与保健食品领域备受关注。CheKine™ 谷氨酸脱羧酶(GAD)活性检测试剂盒(微量法)通过GAD催化谷氨酸生成GABA,再利用经典的berthelot反应测定GABA含量,间接反映GAD活性水平,为细胞代谢及神经生物学研究提供可靠数据支持。

    应用领域:细胞代谢研究、神经递质合成机制探索、GABA能神经元功能分析、药物筛选及保健食品功效评价等细胞水平实验场景。

    谷氨酸脱羧酶(GAD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

    产品参数

    中文名称 谷氨酸脱羧酶(GAD)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
    英文名称 CheKine™ Micro Glutamate Decarboxylase (GAD) Activity Assay Kit
    产品货号 KTB3044
    检测方法 比色法
    试剂盒组分 •Reagent I
    •Reagent Ⅱ
    •Reagent Ⅲ
    •Reagent Ⅳ
    •Reagent Ⅴ
    •Reagent VI
    •Reagent VII
    分子 GAD
    检测指标 GAD
    注意事项 •推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存数周。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4 h内完成样品解冻。
    •实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。
    保存建议 4℃,避光保存 6 个月
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

    自备耗材

    • 酶标仪或可见光分光光度计(能测 640 nm处的吸光度)
    • 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
    • 水浴锅、低温离心机
    • 去离子水
    • 匀浆器或研钵(如果是组织样本)

    试剂准备

    • Extraction Buffer:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。
    • Reagent I:即用型;使用前,平衡到室温。4℃避光保存。
    • Reagent II:即用型;使用前,平衡到室温。4℃避光保存。
    • Reagent III:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。
    • Reagent IV:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。
    • Reagent V:即用型;使用前,平衡到室温。4℃避光保存。
    • Reagent VI:即用型;使用前,平衡到室温。4℃避光保存。
    注意:Reagent V有毒,Reagent VI 有刺激性气味,建议在通风橱进行实验。

    Reagent VII:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。

    样本制备

    注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。
    1. 组织:称取约 0.1 g样本,加入 1 mL Extraction Buffer,冰浴匀浆,8,000 g,4℃离心 10 min,取上清液,置冰上待测。
    2. 血清(浆)等液体样本:直接检测。
    如需测定蛋白浓度,推荐使用 Abbkine货号:KTD3001的蛋白质定量试剂盒(BCA法)进行样本蛋白质浓度测定。

    实验步骤

    1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上,调节波长到 640 nm,可见光分光光度计用去离子水调零。
    2. 操作表(下述操作在 1.5 mL离心管中操作):
    试剂测定孔(μL)对照孔(μL)
    样本1000
    灭活样本(95℃反应 10 min)0100
    ReagentⅠ100100
    Reagent II100100

    混匀,40℃水浴反应 1 h后,95℃水浴 10 min终止反应,冷却至室温,取反应液待用。以下操作在新的 1.5 mL离心管中操作:

    试剂测定孔(μL)对照孔(μL)
    反应液4040
    Reagent III1010
    Reagent IV5050
    Reagent V100100

    混匀,室温静置 5 min。

    试剂测定孔(μL)对照孔(μL)
    Reagent VI100100

    混匀,室温静置 5 min。

    试剂测定孔(μL)对照孔(μL)
    Reagent VII200200

    3. 充分混匀,取 200 μL于 96孔板或微量玻璃比色皿,记录 640 nm处吸光值,测定孔记为 A 测定,对照孔记为 A 对照。计算ΔA=A 测定-A 对照。

    注意:每个测定管设一个对照管。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.02可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 0.8,样本可用 Extraction Buffer进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

    结果计算

    注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

    1. 标准曲线的绘制

    标准条件下测定回归方程为 y=0.0682x-0.0432,R2=0.999;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值。

    2. GAD活性的计算

    (1) 按样本蛋白浓度计算:

    酶活单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol GABA定义为一个酶活力单位。

    GAD(U/mg prot)=(ΔA+0.0432)÷0.0682×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1,000=733×(ΔA+0.0432)÷Cpr

    (2) 按样本鲜重计算:

    酶活单位定义:每克样本每分钟催化产生 1 nmol GABA定义为一个酶活力单位。

    GAD(U/g 鲜重)=(ΔA+0.0432)÷0.0682×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1,000=733×(ΔA+0.0432)÷W

    (3) 按样本体积计算:

    酶活单位定义:每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol GABA为一个酶活力单位。

    GAD(U/mL)=(ΔA+0.0432)÷0.0682×V反总÷(V样÷V样总)÷T×1,000=733×(ΔA+0.0432)

    V 反总:反应体系总体积,0.3 mL;V 样:加入的样本体积,0.1 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1,000:换算系数,1 μmol=1,000 nmol。

    常见问题

    Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多?

    A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。

    Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证?

    A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗?

    A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。

    Q: 该类试剂盒使用量应如何计算?

    A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗?

    A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    文献引用

    请等待最新文献信息更新。

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