吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB3014
Price: 516 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Pyrrolidine-5-Carboxylate Synthase (P5CS) Activity Assay Kit

产品货号

KTB3014

产品特点：

专为植物组织优化，样本类型验证齐全，操作步骤简洁

微量法设计，节省样本与试剂，适配常规酶标仪检测

钼酸铵比色体系灵敏稳定，显色产物在 660 nm 处特异性高

选择规格

48 T/48 S

¥516

现货（次日发货）

96 T/48 S

¥948

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的 CheKine™ 吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）活性检测试剂盒（微量法）是一款专为植物组织样本设计的微量酶活检测工具，通过钼酸铵比色法测定 P5CS 催化谷氨酸生成 P5C 过程中释放的无机磷，从而快速评估植物细胞在逆境胁迫下的脯氨酸合成能力。

背景知识

脯氨酸是植物在干旱、盐渍、低温等逆境中积累的重要渗透调节物质，其合成途径以谷氨酸（Glu）和鸟氨酸（Orn）为初始底物分为两条。其中，吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是谷氨酸途径的限速酶，催化谷氨酸生成吡咯啉-5-羧酸（P5C）并伴随 ATP 水解为 ADP 与无机磷。本试剂盒利用钼酸铵与无机磷形成蓝色络合物的显色反应，在 660 nm 处测定吸光度变化，间接反映 P5CS 活性，为研究植物抗逆机制提供可靠数据。

应用领域

适用于植物生理学、作物抗逆育种及环境胁迫响应研究，可检测叶片、根、茎等植物组织中 P5CS 活性，辅助解析脯氨酸代谢通路在干旱、盐碱、低温等逆境下的调控机制。

产品参数

中文名称	吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Pyrrolidine-5-Carboxylate Synthase (P5CS) Activity Assay Kit
产品货号	KTB3014
样本类型	植物组织
试剂盒组分	• Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent III •Reagent IV •Reagent V •Standard
分子	吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）
检测指标	吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	4℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测 660 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
恒温箱、制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器或研钵（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Working Reagent III：临用前配制；每瓶加入 10 mL去离子水充分溶解待用。用不完的试剂 4℃避光保存 1周。

Working Reagent IV：临用前配制；每瓶加入 10 mL去离子水，60℃水浴充分溶解待用。用不完的试剂 4℃避光保存 1周。

Reagent V：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Working Reagent：临用前配制；按去离子水: Working Reagent III: Working Reagent IV: Reagent V=2: 1: 1: 1的比例配制。现用现配。配好的Working Reagent应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染。

Standard：即用型；10 μmol/mL标准磷溶液；使用前，平衡到室温。4℃保存。

0.5 μmol/mL标准磷溶液：50 µL 10 μmol/mL标准磷溶液用 950 µL去离子水稀释；使用 0.5 μmol/mL标准磷溶液进行后续检测。

注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液待测。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 660 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 酶促反应操作表（下述操作在 1.5 mL EP管进行）：

试剂	测定管（μL）	对照管（μL）
样本	100	0
ReagentⅠ	100	0
混匀，37℃准确反应 10 min。
Reagent II	100	100
ReagentⅠ	0	100
样本	0	100
混匀，8,000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。

3. 定磷反应操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿进行）：

试剂	测定孔（μL）	对照孔（μL）	标准孔（μL）	空白孔（μL）
上清液	20	20	0	0
去离子水	0	0	0	20
Standard	0	0	20	0
Working Reagent	200	200	200	200

4. 混匀，25℃静置 30 min，记录 660 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 1.0，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

P5CS活性的计算：

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每小时每毫克组织蛋白中 P5CS消耗 ATP产生 1 μmol无机磷的量定义为一个酶活力单位。

P5CS (U/mg 蛋白)=C 标准×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 总÷(V 样×Cpr)÷T=9×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每小时每 g组织中 P5CS消耗 ATP产生 1 μmol无机磷的量定义为一个酶活力单位。

P5CS (U/g 鲜重)=C 标准×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 总÷(V 样×W)÷T=9×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

C 标准：标准浓度，0.5 μmol/mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.1 mL；V 总：酶促反应总体积，0.3 mL；T：反应时间：10 min=1/6 h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。