买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。
活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的 CheKine™ 细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）活性检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro Cell-Wall Binding Acid Invertase (B-AI) Activity Assay Kit）是一款基于比色法的微量检测工具，可在 510 nm 处通过棕红色产物的吸光度变化，快速评估植物组织样本中细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）的活性。
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）是高等植物蔗糖代谢网络中的关键限速酶，可不可逆地将蔗糖水解为果糖与葡萄糖。根据最适 pH 的差异，高等植物 Ivr 被划分为酸性转化酶（AI）与中性转化酶（NI）两类，其中 AI 的最适 pH 为 3–5。AI 又进一步分为可溶性 AI（S-AI）和细胞壁不溶性 AI（B-AI）。B-AI 定位于细胞间隙并紧密结合在细胞壁上，在韧皮部质外体卸载过程中发挥核心作用，通过持续分解蔗糖来维持库–源之间的蔗糖浓度梯度。
本试剂盒利用 B-AI 催化蔗糖水解产生还原糖，还原糖再与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，生成棕红色氨基化合物，其在 510 nm 处具有特征吸收峰。在一定范围内，510 nm 处吸光度的增加速率与 B-AI 活性呈正比，从而实现对 B-AI 活性的微量、快速、定量检测。
本试剂盒适用于植物生理学、作物抗逆研究、糖代谢调控机制探索等方向，可用于检测各类植物组织（叶片、根、茎、果实等）中细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）的活性变化，为解析蔗糖卸载、库源关系及植物生长发育提供可靠数据支持。
| 中文名称 | 细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Cell-Wall Binding Acid Invertase (B-AI) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB2293 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction BufferI •Extraction Buffer Ⅱ •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard |
| 分子 | B-AI |
| 检测指标 | B-AI |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction BufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
注意：Extraction BufferⅠ有刺激性气味，Reagent III 有毒且有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
Extraction Buffer II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：临用前配制；48 T加入 8 mL ReagentⅠ，96 T加入 16 mL ReagentⅠ，充分溶解。用不完的试剂 4℃保存 2周。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Standard：临用前配制；加入 1 mL去离子水，充分溶解得 10 mg/mL，用不完的试剂 4℃保存 1个月。使用 10 mg/mL Standard，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 200 μL 10 mg/mL Standard | 800 | 2 |
| Std.2 | 600 μL of Std.1 (2 mg/mL Standard) | 200 | 1.5 |
| Std.3 | 200 μL of Std.1 (2 mg/mL Standard) | 200 | 1 |
| Std.4 | 200 μL of Std.3 (1 mg/mL Standard) | 200 | 0.5 |
| Std.5 | 200 μL of Std.4 (0.5 mg/mL Standard) | 200 | 0.25 |
| Blank | 0 | 400 | 0 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction BufferⅠ，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心 10 min，弃上清，沉淀中加入 1 mL去离子水，充分震荡混匀，12,000 g，4℃离心 10 min，弃上清，沉淀中加入 1 mL Extraction Buffer II 充分混匀，4℃浸提过夜，12,000 g，4℃离心 20 min，取上清液，置冰上待测。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 510 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 对照孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 50 | 50 |
| Standard | 0 | 50 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 50 | 0 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 0 | 0 | 200 | 0 |
| Reagent II | 200 | 200 | 0 | 200 |
混匀，37℃保温 30 min，置 95℃水浴中 10 min（盖紧，防止水分散失），流水冷却。
Reagent III 125 125 125 125
3. 混匀，95℃水浴 10 min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 510 nm处吸光值 A。空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本的ΔA 测定小于 0.1，可适当增大样本量，如果ΔA 测定大于 1,000 nmol/mL的ΔA 标准，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (mg/mL)。
2. B-AI含量的计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算：
酶活单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
B-AI (U/mg prot)=33.3x÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
酶活单位定义：37℃每克样本每分钟产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
B-AI (U/g 鲜重)=33.3x÷W
V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer II 体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1,000：换算系数，1 mg/mL=1,000 µg/mL。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
货号：BMU103
SuperKine™ 增强型抗体稀释液 (SuperKine™ Enhanced Antibody Dilution Buffer) 是一款即用型、通用型抗体稀释液，...
货号：BMU101
SuperKine™ 增强型ECL发光液（皮克级） (SuperKine™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate) 是一套基于经典...
我们的技术团队为您提供全方位的产品支持服务
根据您的研究目标，提供个性化的实验设计方案
经验丰富的技术专家协助您解决实验中遇到的问题
7x24小时在线技术支持，随时为您答疑解惑
提供免费样品试用，让您先试后买更放心
