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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 可溶性酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，专为植物细胞代谢研究设计，可在 510 nm 处通过棕红色氨基化合物的生成速率，快速评估细胞液泡或自由空间中可溶性酸性转化酶（S-AI）的活性。
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）是高等植物蔗糖代谢的关键酶，催化蔗糖不可逆分解为果糖与葡萄糖。根据最适 pH，可分为酸性转化酶（AI）与中性转化酶（NI）。其中，酸性转化酶又细分为可溶性酸性转化酶（S-AI）和细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）。S-AI 主要定位于细胞液泡或自由空间，最适 pH 约 4.5–5.0，通过降解液泡内蔗糖，调节蔗糖利用及果实糖类积累。本试剂盒利用 S-AI 催化蔗糖产生还原糖，后者与 3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色氨基化合物，在 510 nm 处吸光度随时间线性增加，其增加速率与 S-AI 活性成正比，从而实现对植物组织中 S-AI 活性的定量分析。
植物细胞代谢研究、果实糖积累机制探索、逆境生理及品种改良等细胞水平的基础科研场景。
| 中文名称 | 可溶性酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Soluble Acid Anvertase (S-AI) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB2292 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard |
| 分子 | S-AI |
| 检测指标 | S-AI |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：临用前配制；48 T加入 8 mL ReagentⅠ，96 T加入 16 mL ReagentⅠ，充分溶解。用不完的试剂 4℃保存 2周。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Standard：临用前配制；加入 1 mL去离子水，充分溶解得 10 mg/mL，用不完的试剂 4℃保存 1个月。使用 10 mg/mL Standard，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 200 μL 10 mg/mL Standard | 800 | 2 |
| Std.2 | 600 μL of Std.1 (2 mg/mL Standard) | 200 | 1.5 |
| Std.3 | 200 μL of Std.1 (2 mg/mL Standard) | 200 | 1 |
| Std.4 | 200 μL of Std.3 (1 mg/mL Standard) | 200 | 0.5 |
| Std.5 | 200 μL of Std.4 (0.5 mg/mL Standard) | 200 | 0.25 |
| Blank | 0 | 400 | 0 |
植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，12,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 510 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 对照孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 50 | 50 |
| Standard | 0 | 50 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 50 | 0 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 0 | 0 | 200 | 0 |
| Reagent II | 200 | 200 | 0 | 200 |
混匀，37℃保温 30 min，置 95℃水浴中 10 min（盖紧，防止水分散失），流水冷却。
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 对照孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| Reagent III | 125 | 125 | 125 | 125 |
3. 混匀，95℃水浴 10 min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 510 nm处吸光值 A。空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (mg/mL)。
2. S-AI含量的计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算：
酶活单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
S-AI (U/mg prot)=33.3x÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
酶活单位定义：37℃每克样本每分钟产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
S-AI (U/g 鲜重)=33.3x÷W
V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1,000：换算系数，1 mg/mL=1,000 µg/mL。
以下数据仅供参考，实验者需根据自己的实验对样品进行检测。
Figure 1. 本试剂盒测定玉米种子和土豆根茎中 S-AI的活性。
| Catalog No. | Product Name |
|---|---|
| KTB3110 | CheKine™ 蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒（微量法） |
| KTB1560 | CheKine™ 酰基转移酶（AAT）活性检测试剂盒（微量法） |
| KTB1270 | CheKine™ 丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒（微量法） |
本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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