甘油三酯(TG)检测试剂盒(微量法)-CheKine™

自备耗材

• 酶标仪或可见分光光度计（能测 505 nm处的吸光度）
• 恒温箱、制冰机、低温离心机
• 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
• 去离子水、EP管
• 匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

试剂准备

• Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
• Working ReagentⅠ：临用前配制；48 T加入 6 mL ReagentⅢ，96 T加入 12 mL ReagentⅢ充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
• Working ReagentⅡ：临用前配制；48 T加入 6 mL ReagentⅢ，96 T加入 12 mL ReagentⅢ充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
• Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
• Working Solution: 现配现用，每孔配制 190 μL Working Solution，按照实际用量将Working ReagentⅠ和Working ReagentⅡ按照 1:1的比例混合均匀。
• Standard：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

样本制备

1. 动物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer捣碎，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
3. 细胞或细菌：收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞或细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
4. 血清（浆）、细胞上清等液体样本：直接测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 505 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
2. 甘油三酯含量的测定（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中操作）：

混匀，室温下静置 20min，于 505 nm 波长处读取吸光值，空白管记为 A 空白，标准管记为 A 标准、测定管记为 A 测定，△A 测定=A 测定-A 空白，△A 标准=A 标准-A 空白。

结果计算

1. 液体样本中甘油三酯含量：

2. 动（植）物组织中甘油三酯含量：

1. 按样本蛋白浓度计算：

2. 按样本鲜重计算：

3. 细胞、细菌中甘油三酯含量：

CStandard: 1.25 mg/mL；100: 1 dL=100 mL；Cpr: 样本蛋白浓度，mg/mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；W: 样本鲜重，g；V 样总: 样品制备加入 Extraction Buffer的体积，1 mL；500: 细胞或细菌总数，500万。