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线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
CheKine™ Micro Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) Activity Assay Kit
产品特点:
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活动截止时间:2024年1月31日
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CheKine™ 线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)是一款专为细胞代谢研究设计的微量比色法试剂盒,可在动植物组织样本中快速、准确地测定线粒体转氢酶-2(TH-2)的活性,为研究线粒体能量代谢及NAD(H)/NADP(H)平衡提供可靠工具。
背景原理
转氢酶(TH)定位于线粒体内膜,又称线粒体复合体六,催化NADH+NADP+与NAD++NADPH之间的相互转化,从而精细调节线粒体内NAD(H)与NADP(H)的稳态平衡。本试剂盒采用逆向反应体系:以人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代天然NAD+,TH-2催化APAD+还原生成APADH。APADH在375 nm处具有特征吸收峰,通过连续监测375 nm吸光度的上升速率,即可计算TH-2活性。由于NADH与NADPH在340 nm均有吸收,传统340 nm检测无法区分转氢反应,而本方法通过APAD+/APADH体系巧妙避开干扰,实现高特异性检测。
应用领域
本试剂盒主要用于细胞代谢研究,特别适合探索线粒体功能、能量代谢重编程、氧化还原稳态及动植物组织在生理或病理状态下TH-2活性的变化,为细胞分析、代谢疾病机制研究及药物筛选提供可靠数据支持。
| 中文名称 | 线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1840 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动植物组织 |
| 试剂盒组分 | •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Reagent Ⅴ |
| 检测范围 | •测定动植物组织样本的线粒体转氢酶-2(TH-2)活性。 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。 |
| 分子 | Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) |
| 检测指标 | Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存数周。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃,避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输(蓝冰) |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 |
注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Reagent I:即用型;使用前,平衡到室温。-20℃保存。
Reagent II:即用型;使用前,平衡到室温。-20℃保存。
Working Reagent:临用前配制;将 Reagent IV、V 转移到 Reagent III 中混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5 min;用不完的试剂分装后-20℃避光保存 1个月,禁止反复冻融。
注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。
| 试剂 | 测定孔(μL) |
|---|---|
| 样本 | 20 |
| Working Reagent | 180 |
3. 混匀,立即记录 375 nm处初始吸光值 A1和 10 min后的吸光值 A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.25可适当加大样本量。如果ΔA大于 1.2,样本可用 ReagentⅠ或 Reagent II 进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。
注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
按样本鲜重计算:
酶活单位定义:每 g组织每分钟产生 1 nmol APADH定义为一个酶活性单位。
TH-2(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=149×ΔA÷W
V 反总:反应总体积,2×10-4 L;ε:APADH摩尔消光系数,6.7×103 L/mol/cm;d:96孔 UV 板光径,0.5 cm;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入 Reagent II 体积,0.5 mL;W:样本质量,g;T:反应时间,10 min。
A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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