×

线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

CheKine™ Micro Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) Activity Assay Kit

产品货号
KTB1840

产品特点:

  • 验证样本类型齐全:适用于多种动植物组织,覆盖常见细胞代谢研究模型
  • 微量比色法:仅需少量样本即可完成检测,节省珍贵组织
  • 操作简便:配套完整试剂组分与详细样品制备、结果计算流程,实验上手快
  • 高特异性:采用APAD+/APADH体系,有效避免NADH/NADPH背景干扰
  • 稳定保存:-20 °C避光保存6个月,冰袋运输保障试剂活性
  • 选择规格

    48 T/48 S
    ¥998
    现货(次日发货)
    96 T/96 S
    ¥1598
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    CheKine™ 线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)是一款专为细胞代谢研究设计的微量比色法试剂盒,可在动植物组织样本中快速、准确地测定线粒体转氢酶-2(TH-2)的活性,为研究线粒体能量代谢及NAD(H)/NADP(H)平衡提供可靠工具。

    背景原理
    转氢酶(TH)定位于线粒体内膜,又称线粒体复合体六,催化NADH+NADP+与NAD++NADPH之间的相互转化,从而精细调节线粒体内NAD(H)与NADP(H)的稳态平衡。本试剂盒采用逆向反应体系:以人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代天然NAD+,TH-2催化APAD+还原生成APADH。APADH在375 nm处具有特征吸收峰,通过连续监测375 nm吸光度的上升速率,即可计算TH-2活性。由于NADH与NADPH在340 nm均有吸收,传统340 nm检测无法区分转氢反应,而本方法通过APAD+/APADH体系巧妙避开干扰,实现高特异性检测。

    应用领域
    本试剂盒主要用于细胞代谢研究,特别适合探索线粒体功能、能量代谢重编程、氧化还原稳态及动植物组织在生理或病理状态下TH-2活性的变化,为细胞分析、代谢疾病机制研究及药物筛选提供可靠数据支持。

    线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

    产品参数

    中文名称 线粒体转氢酶-2(TH-2)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
    英文名称 CheKine™ Micro Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2) Activity Assay Kit
    产品货号 KTB1840
    检测方法 比色法
    样本类型 动植物组织
    试剂盒组分 •Reagent I
    •Reagent Ⅱ
    •Reagent Ⅲ
    •Reagent Ⅳ
    •Reagent Ⅴ
    检测范围 •测定动植物组织样本的线粒体转氢酶-2(TH-2)活性。
    • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。
    分子 Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2)
    检测指标 Mitochondrial Transhydrogenase-2 (TH-2)
    注意事项 •推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存数周。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4 h内完成样品解冻。
    •实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。
    保存建议 -20℃,避光保存 6 个月
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

    自备耗材

    • 酶标仪或紫外光分光光度计(能测 375 nm处的吸光度)
    • 96孔 UV板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
    • 水浴锅、低温离心机
    • 去离子水
    • 匀浆器或研钵(如果是组织样本)

    试剂准备

    Reagent I:即用型;使用前,平衡到室温。-20℃保存。

    Reagent II:即用型;使用前,平衡到室温。-20℃保存。

    Working Reagent:临用前配制;将 Reagent IV、V 转移到 Reagent III 中混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5 min;用不完的试剂分装后-20℃避光保存 1个月,禁止反复冻融。

    样本制备

    注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。

    1. 组织中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:称取约 0.1 g样本,加入 1 mL ReagentⅠ,用匀浆器或研钵冰浴匀浆;
    2. 600 g,4℃离心 5 min。弃沉淀,将上清液移至另一离心管中;
    3. 11,000 g,4℃离心 10 min,此步中上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的 TH-2(可选做);
    4. 步骤 3中沉淀即为线粒体,加入 500 μL Reagent II,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200 W,超声 3 s,间隔 10 s,重复 30次),用于 TH-2活性测定。

    实验步骤

    1. 酶标仪或紫外光分光光度计预热 30 min以上,调节波长到 375 nm,紫外光分光光度计用去离子水调零。
    2. 操作表(下述操作在微量石英比色皿或 96孔 UV板中操作):
    试剂测定孔(μL)
    样本20
    Working Reagent180

    3. 混匀,立即记录 375 nm处初始吸光值 A1和 10 min后的吸光值 A2,计算ΔA=A2-A1。

    注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.25可适当加大样本量。如果ΔA大于 1.2,样本可用 ReagentⅠ或 Reagent II 进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

    结果计算

    注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

    TH-2活性的计算:

    按样本鲜重计算:

    酶活单位定义:每 g组织每分钟产生 1 nmol APADH定义为一个酶活性单位。

    TH-2(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=149×ΔA÷W

    V 反总:反应总体积,2×10-4 L;ε:APADH摩尔消光系数,6.7×103 L/mol/cm;d:96孔 UV 板光径,0.5 cm;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入 Reagent II 体积,0.5 mL;W:样本质量,g;T:反应时间,10 min。

    常见问题

    Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多?

    A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。

    Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证?

    A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗?

    A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。

    Q: 该类试剂盒使用量应如何计算?

    A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗?

    A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    文献引用

    请等待最新文献信息更新。

    相关资讯

    专业技术支持

    我们的技术团队为您提供全方位的产品支持服务

    实验方案设计

    根据您的研究目标,提供个性化的实验设计方案

    问题排查

    经验丰富的技术专家协助您解决实验中遇到的问题

    在线技术咨询

    7x24小时在线技术支持,随时为您答疑解惑

    免费样品申请

    提供免费样品试用,让您先试后买更放心

    400电话
    在线咨询
    技术支持
    公众号
    公众号
    返回顶部