过氧化氢酶(CAT) 活性分析试剂盒(微量法)-CheKine™

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

注意事项

• 正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
• 对于组织样本及细胞样本等，可通过测定蛋白浓度来进行样本间结果均一化。推荐使用亚科因货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）。
• 本试剂盒兼容分光光度计检测，请按照分光光度计检测要求按比例调节检测试剂配制量。如有疑问，可咨询本司技术人员（400-6800-830）。
• 建议实验者自行建立标准曲线以提高结果准确度。如未自行建立标准曲线，可参考结果展示部分的典型标准曲线公式进行结果计算。
• 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
• 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

试剂准备

标准品配制

用 9.99 mL 1×Sample Diluent 稀释 10 µL Formaldehyde Standard，得到 4.25 mM的储存液。按下表所示，进一步稀释标准品。

注意：最终浓度是指在 170 µL反应体系里的终浓度。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月

• 动植物组织样本：称取 0.1 g组织加入 1 mL预冷的 1×Lysis buffer将样本进行匀浆。匀浆后的样本，10000 g，4℃离心 15 min，取上清液做进一步分析。
• 血清、血浆样本：按常规方法收集血清，1×Sample Diluent 稀释后即可作为血清样本进行检测；用抗凝管收集血液，颠倒混匀。600 g，4℃离心 10 min，移取上清至另一新的离心管中，适量 1×Sample Diluent 稀释后即可作为血浆样本进行检测。
• 细胞样本：收集 5×106个细胞加入 1 mL预冷的 1×Lysis buffer，冰上匀浆，10000 g，4℃离心 15 min，取上清液做进一步分析。

实验步骤

1. 酶标仪准备：预热 30 min以上，调节波长到 540 nm。

2. 检测体系配制：在 96孔板中按照如下方式加样。

3. 吸光度检测：充分混匀，室温孵育 5 min，立即测定 540 nm 处的吸光值 A，分别记为 A 空白、A 标准、A 测定。

结果计算

自动计算

为帮助您更轻松、准确地完成相关计算，我们特在官网提供了"在线计算器小工具"。您无需手动计算，只需在网页上输入数值，即可快速获得可靠结果。访问方式：官网[https://www.abbkine.cn]进入"技术中心"查找"在线计算器"工具。

手动计算

以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。

1. 数据处理

计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

2. 标准曲线绘制

以标准溶液最终浓度(µM)为 y轴，ΔA 标准为 x轴，绘制标准曲线。

3. 根据标曲计算样本产生的甲醛浓度

y 样(µM)=y×(0.17 mL÷0.02 mL)=8.5×y

4. 样本 CAT活性计算

单位的定义：室温下，每分钟产生 1.0 nmol甲醛的酶的量定义为一个酶活力单位。

• 按样本蛋白浓度计算

CAT(nmol/mg prot)=y 样÷T÷Cpr×n=8.5×y÷20÷Cpr×n=0.425×y÷Cpr×n

• 按液体体积计算

CAT (nmol/mL)=y 样÷T×n=8.5×y÷20×n=0.425×y×n

• 按样本质量计算

CAT (nmol/g)=y 样÷T÷W×n=8.5×y÷20÷W×n=0.425×y÷W×n

• 细胞数量计算

CAT (nmol/104)=y 样÷T÷500×n=8.5×y÷20÷500×n=0.00085×y×n

nmol：1 μM=1 nmol/mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，20 min；500：细胞数量，5×106，以 104为单位；n：样本稀释倍数。