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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 纤维素（CLL）含量检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的微量比色法试剂盒，可在 96 孔板体系内对细胞培养物或细胞裂解液中的纤维素（CLL）进行定量分析，为探索细胞壁合成、植物细胞分化及微生物纤维素代谢提供可靠工具。
纤维素（CLL）是细胞壁中最丰富的结构多糖，其含量变化直接反映细胞壁重塑、细胞机械强度及碳源分配状态。CheKine™ 纤维素（CLL）含量检测试剂盒（微量法）利用经典酸水解-显色原理：样本经温和酸解后，CLL 被定量转化为还原糖；还原糖与试剂盒提供的显色体系发生特异性反应，在 620 nm 处产生稳定的颜色信号，吸光度与 CLL 含量成正比。整个反应在微量体系内完成，节省样本与试剂，适合高通量细胞代谢筛选。
应用领域：植物细胞壁代谢研究、微生物纤维素合成途径分析、合成生物学中细胞碳流分配评估、药物筛选中细胞壁靶向化合物活性评价等细胞代谢相关研究。
| 中文名称 | 纤维素(CLL)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Cellulose (CLL) Concent Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1720 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard |
| 分子 | CLL |
| 检测指标 | CLL |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Working Reagent II：临用前配制；48 T加入 2.8 mL Reagent III，96 T加入 5.6 mL Reagent III 充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂 4℃保存一周。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
注意：Reagent I，Reagent II 和 Reagent III 有毒且有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
Standard：临用前配制；加入 1 mL去离子水溶解，配成 10 mg/mL葡萄糖溶液备用，4℃可保存两周。
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 25 µL 10 mg/mL Standard | 975 | 0.25 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (0.25 mg/mL) | 500 | 0.125 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (0.125 mg/mL) | 500 | 0.0613 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (0.0613 mg/mL) | 500 | 0.0306 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (0.0306 mg/mL) | 500 | 0.0153 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (0.0153 mg/mL) | 500 | 0.0077 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (0.0077 mg/mL) | 500 | 0.0038 |
| Std.8 | 0 | 500 | 0（空白管） |
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
1. 称取新鲜样品 0.3 g（记为W1），80℃烘干 2 h（可适当延长）至恒重，粉碎，过 40目筛。烘干样本中加入 1mL 80%乙醇，90℃水浴 20 min（建议用封口膜封口或使用带螺旋盖的 EP管），冷却至室温，8,000 g 25℃离心 10 min，弃上清。沉淀中加入 1.5 mL80%乙醇和丙酮各清洗一遍（涡旋振荡 2 min左右，8,000g 25℃离心 10 min，弃上清），沉淀烘干后即为粗细胞壁，称其重量记为W2。
2. 称取上述粗细胞壁 0.01 g（记为W3）加入 1 mL Reagent I，充分混匀，90℃水浴 30 min（建议用封口膜封口或使用带螺旋盖的 EP管）。取出冷却后 8,000 g 25℃离心 10 min，弃上清。沉淀中加入 1 mL去离子水混匀，涡旋振荡 2 min左右，8,000 g 25℃离心 10 min，弃上清，沉淀用去离子水重复清洗 3次（加入 1 mL去离子水混匀，涡旋振荡 2 min左右，8,000 g 25℃离心 10 min，弃上清）。沉淀中加入 1 mL丙酮，混匀后 8,000 g 25℃离心 10 min，弃上清，沉淀烘干待用。
3. 在上述烘干的沉淀中加入 0.5 mL去离子水溶解（如果不能充分溶解，可以适当匀浆或超声促进溶解），置于冰水浴中，缓慢加入 0.75 mL浓硫酸，混匀，冰水浴中静置 30 min，取部分上清液，用去离子水稀释 20倍，8,000 g 4℃离心 10 min，取上清液待测。
注意：部分样本中纤维素含量较低（淀粉含量较高），如米粉、板栗、甘薯等，可不稀释或减小稀释倍数。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min，调节波长到 620 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 调节水浴锅至 95℃。
3. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中进行）：
| 试剂 | 空白管（μL） | 测定管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|
| 上清液 | 0 | 150 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 150 |
| 去离子水 | 150 | 0 | 0 |
| Working Reagent II | 35 | 35 | 35 |
| 浓硫酸 | 315 | 315 | 315 |
混匀，置于 95℃水浴中 10 min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取 200 μL上层液加入微量玻璃比色皿或 96孔板（非聚苯乙烯材质），于 620 nm处测定吸光值，分别记为 A 空白、A 测定和 A 标准。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：标准曲线和空白管只需测 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.03可减小稀释倍数或适当加大样本量，如果ΔA 测定大于 1.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (mg/mL)。
2. CLL含量的计算
（1）按样本鲜重计算
CLL (mg/g 鲜重)=x×V 提取×20×(W2÷W3)÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
（2）按样本细胞壁物质质量计算
CLL (mg/g 干重)=x×V 提取×20÷W3÷1.11=22.52×x÷W3
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为 CLL含量的常数，即 111 µg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于 100 µg CLL蒽酮试剂所显示的颜色；V 提取：CLL提取液体积，1.25 mL（0.5 mL去离子水+0.75 mL浓硫酸）；20：样本稀释倍数；W1：样本鲜重，0.3 g；W2：样本细胞壁物质质量，g；W3，提取 CLL时称取的细胞壁物质质量，0.01 g。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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