γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1680
Price: 378 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro γ-Glutamyl Cysteine Ligase (GCL) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1680

产品特点：

兼容细胞、细菌、真菌、血清、动植物组织等多样本类型，实现 GCL 活性广谱检测

提供完整 Extraction Buffer、反应底物及标准品，配套详细样品制备与结果计算流程

微量法设计，节省样本与试剂，适合高通量筛选与珍贵样本研究

选择规格

48 T/48 S

¥378

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96 T/96 S

¥598

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可在细胞、细菌、真菌、血清及动植物组织等多种生物样本中快速测定 GCL 的催化活性，为研究谷胱甘肽（GSH）合成通路的限速步骤提供可靠数据。

γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL, γ-Glutamyl Cysteine Ligase）是谷胱甘肽（GSH）生物合成途径的限速酶，催化谷氨酸与半胱氨酸缩合生成 γ-谷氨酰半胱氨酸。GSH 作为细胞内最重要的非蛋白硫醇，其含量与 GSH/GSSG 比值直接受 GCL 活性调控；而 GSH 本身又通过负反馈机制抑制 GCL 活性，形成精密的自我调节网络。氧化剂、抗氧化剂、生长因子及炎症因子等多种刺激均可通过转录或翻译后修饰调节 GCL 表达与活性，因此 GCL 活性检测已成为细胞氧化应激、代谢重编程及药物作用机制研究的关键指标。

应用领域

本试剂盒适用于细胞代谢、氧化应激、药物毒理、植物逆境生理及微生物代谢工程等领域的科研实验室，帮助研究人员定量评估 GCL 活性变化，进而解析 GSH 合成调控机制与细胞抗氧化能力。

产品参数

中文名称	γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro γ-Glutamyl Cysteine Ligase (GCL) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1680
检测类型	氨基酸代谢
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer • Reagent I A • Reagent I B • Reagent II • Reagent III • Reagent IV • Standard
分子	GCL
检测指标	GCL
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力。如果是匀浆液，避免反复冻融。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅠA：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working ReagentⅠB：临用前 96 T加 2.4 mL去离子水，48 T加 1.2 mL去离子水，充分震荡溶解，用不完的试剂分装-20℃保存 1个月，避免反复冻融。
Working ReagentⅠ：临用前，根据样本量按照 ReagentⅠA:Working ReagentⅠB=2:1比例配制，现用现配，当天用完。
Working ReagentⅡ：临用前配制，每管加 1.53 mL去离子水，充分震荡溶解。用不完的试剂分装-20℃保存 1周，避免反复冻融。
Reagent Ⅲ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working ReagentⅣ：每瓶加 13.5 mL去离子水，充分震荡溶解后，缓缓加入 450 µL浓硫酸边加边搅拌，用不完的试剂分装-20℃保存 1周，避免反复冻融。

注意：浓硫酸具有强腐蚀性，请注意安全。配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。该溶液配制完成后应为浅黄色，若为蓝色则已污染，不可再使用。

标准曲线设置

按下表所示用去离子水将 8 μmol/mL标准液稀释成 0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.125 μmol/mL标准溶液。

序号	标准品体积	去离子水体积（µL）	标准品浓度（μmol/mL）
Std.1	100 µL of 8 μmol/mL	900	0.8
Std.2	100 µL of Std.1(0.8 μmol/mL)	100	0.4
Std.3	100 µL of Std.2 (0.4 μmol/mL)	100	0.2
Std.4	100 µL of Std.3 (0.2 μmol/mL)	100	0.1
Std.5	100 µL of Std.4 (0.1 μmol/mL)	100	0.05
Std.6	100 µL of Std.5 (0.05 μmol/mL)	100	0.025
Std.7	100 µL of Std.6 (0.025 μmol/mL)	100	0.0125

注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力。如果是匀浆液，避免反复冻融。细胞中 GCL活性测定时，细胞数目须在 300万-500万之间，细胞中 GCL的提取时可加 Extraction Buffer后超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

动植物组织样本：称取约 0.1 g组织，加入 1mL Extraction Buffer，进行冰浴匀浆，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
细菌、真菌、细胞：收集 500万细菌、真菌或细胞加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次）；然后 8,000 g，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。
血清（浆）等液体：直接测定。

注意：如需要进行样本蛋白质浓度测定时，推荐用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）。

实验步骤

酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 660 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
水浴锅预热到 37℃。
样本测定（在 EP管中依次加入下列试剂）：

试剂	空白管（μL）	标准管（μL）	测定管（μL）	对照管（μL）
样本	0	0	24	0
Extraction Buffer	0	0	48	100
Working ReagentⅠ	0	0	52	0
Working ReagentⅡ	0	0	12	12
混匀后盖紧，37℃水浴反应 15 min	-	-	-	-
ReagentⅢ	0	0	60	60
样本	0	0	0	24
混匀后，室温（25℃左右）10,000 rpm，离心 10 min	-	-	-	-
上清	0	0	100	100
Different Concentration Std.	0	100	0	0
去离子水	100	0	0	0
Working Reagent IV	100	100	100	100

混匀后盖紧，45℃水浴 10 min，冷却至室温后，取 180 μL上清加入微量玻璃比色皿或 96孔板在测定 660 nm处光吸收，尽快测完，分别记为 A 空、A 测定、A 标、A 对照。计算ΔA 测=A 测定-A 对照，ΔA 标=A 标准-A 空白，空白管只需做一个。

注意：测定吸光值时，请于水浴后 10-40 min内测完。样本测定前先取 2-3个样做预实验，如ΔA 测大于 2，应先用 Extraction Buffer稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内，计算公式中乘以相应稀释倍数。如果 A 测低于 0.005，可适当增加样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 y 轴，ΔA 标为 x 轴，绘制标准曲线。将ΔA 测代入公式中（x）计算 y（μmol/mL）。

2. γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）活性的计算

(1) 按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃下，每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μmol无机磷的 GCL酶活量为 1个酶活力单位。

GCL (U/mg prot)=(y×V 反总)÷(Cpr×V 样)÷T=0.54×y÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

活性单位定义：37℃下，每克样品每分钟催化产生 1 μmol无机磷的 GCL酶活量为 1个酶活力单位。

GCL (U/g 鲜重)=(y×V 反总)÷(W÷V 样总×V 样)÷T=0.54×y÷W

(3) 按细胞或细菌数量计算

活性单位定义：37℃下，每 10⁴个细胞或细菌每分钟催化产生 1 μmol无机磷的 GCL酶活量为 1个酶活单位。

GCL (U/10⁴)=(y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.08×10^-3×y

(4) 按血清（浆）等液体体积计算

活性单位定义：37℃下，每毫升液体每分钟催化产生 1 μmol无机磷的 GCL酶活量为 1个酶活单位。

GCL (U/mL)=(y×V 反总)÷V 样÷T=0.54×y

V 反总：反应总体积，0.196 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；V 样：加入样品体积，0.024 mL；T：反应时间，15 min；W：样品鲜重，g；V 样总：加入 Extraction Buffer的体积，1 mL；500：细胞或细菌总数，500万

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

ZIF-8-based nanoparticles for inflammation treatment and oxidative stress reduction in periodontitis.

杂志名称: ACS Applied Materials & Interfaces | 作者: Li, Yaxin, et al.

IF: 8 | 发表时间: 2024

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