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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 糖化酶活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可在 540 nm 处通过红棕色产物的吸光度变化，快速、定量地测定动植物组织、细菌、培养细胞、血清（浆）及其他液体样本中的糖化酶（葡萄糖淀粉酶）活性。
糖化酶（EC 3.2.1.3，又称 γ-淀粉酶）是一类由多种微生物分泌的外切型胞外酶，能够从淀粉、糊精、糖原等碳链的非还原末端依次水解 α-1,4 糖苷键，逐个释放葡萄糖单元；遇到分支点时亦可切断 α-1,6 糖苷键，从而将支链淀粉彻底水解为葡萄糖。该酶在酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸、甘油及淀粉糖等工业发酵过程中发挥关键作用，是我国重要的工业酶制剂之一。CheKine™ 糖化酶活性检测试剂盒利用糖化酶将可溶性淀粉转化为葡萄糖，再在碱性条件下与 3,5-二硝基水杨酸共热生成红棕色化合物，540 nm 处的吸光度与葡萄糖浓度成正比，进而反映糖化酶活性。
应用领域：细胞代谢研究、工业发酵过程监控、食品与酿造工艺优化、微生物酶制剂活性评价等。
| 中文名称 | 糖化酶活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Glucoamylase Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1570 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动植物组织、细菌和细胞、血清（浆）或其他液体 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 检测范围 | •测定动植物组织、细菌和细胞、血清（浆）或其他液体样本内的糖化酶活性。 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。 |
| 分子 | Glucoamylase |
| 检测指标 | Glucoamylase |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。（若出现沉淀，可以 90℃加热 5 min溶解后使用）
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
注意：Reagent II 有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。
Standard：临用前配制；加入 1 mL Extraction Buffer溶解，配制成 10 mg/mL葡萄糖溶液备用，4℃保存 2周。
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 200 μL 10 mg/mL Standard | 800 | 2.0 |
| Std.2 | 150 μL of Std.1 (2.0 mg/mL) | 50 | 1.5 |
| Std.3 | 300 μL of Std.1 (2.0 mg/mL) | 300 | 1.0 |
| Std.4 | 320 μL of Std.3 (1.0 mg/mL) | 80 | 0.8 |
| Std.5 | 200 μL of Std.4 (0.8 mg/mL) | 200 | 0.4 |
| Std.6 | 200 μL of Std.5 (0.4 mg/mL) | 200 | 0.2 |
| Std.7 | 200 μL of Std.6 (0.2 mg/mL) | 200 | 0.1 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 10 | 0 |
| 灭活样本 | 0 | 0 | 0 | 10 |
| Standard | 0 | 10 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，放入 40℃水浴 20 min
| Reagent II | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 90 | 90 | 90 | 90 |
3. 充分混匀，沸水浴 5 min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，取 200 μL至微量玻璃比色皿或 96孔板中，记录 540 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定，对照孔记为 A 对照。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.05可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 2 mg/mL的ΔA 标准，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。蛋白含量较高的样本建议用 Extraction Buffer稀释后再进行处理及检测。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将ΔA 测定带入方程得到 x(mg/mL)。
酶活单位定义：在 40℃，pH4.6条件下，每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1 mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶(U/mg prot)=x×V反总÷(V样×Cpr)÷T=5.5x÷Cpr
酶活单位定义：在 40℃，pH4.6条件下，每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1 mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶(U/g 鲜重)=x×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=5.5x÷w
酶活单位定义：在 40℃，pH4.6条件下，每 104个细菌或细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1 mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶(U/104)=x×V反总÷(V样×n÷V样总)÷T=0.55x÷n
酶活单位定义：在 40℃，pH4.6条件下，每毫升液体每分钟分解可溶性淀粉产生 1 mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶(U/mL)=x×V反总÷V样÷T=0.55x
V 反总：反应总体积，0.11 mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，20 min；n：细菌或细胞数量，万。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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