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苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

CheKine™ Micro Phenylalanine Ammonia Lyase (PAL) Activity Assay Kit

产品货号
KTB1160

产品特点:

  • 专为微量样本设计,可在96孔板内完成高通量检测
  • 提供即用型Extraction Buffer、Assay Buffer、Substrate及终止液HCl,简化实验流程
  • 附带详细的样品制备与结果计算说明,方便快速上手
  • 选择规格

    48 T/48 S
    ¥669
    现货(次日发货)
    96 T/96 S
    ¥1016
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    CheKine™ 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒(微量法)(CheKine™ Micro Phenylalanine Ammonia Lyase (PAL) Activity Assay Kit, Cat. KTB1160)是一款基于比色法的微量检测工具,可在96孔板内快速、定量测定细胞裂解液、植物组织匀浆等生物样本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,为细胞代谢与苯丙烷类次生代谢研究提供便捷手段。

    PAL(EC 4.3.1.5)是植物及少数微生物中苯丙烷类代谢的关键限速酶,动物体内尚未发现。该酶催化苯丙氨酸脱氨生成反式肉桂酸,进而驱动木质素、黄酮、异黄酮植保素等重要次生物质的合成,与植物的正常发育、抗病反应及逆境胁迫响应密切相关。本试剂盒通过检测PAL催化底物苯丙氨酸生成肉桂酸后所引起的290 nm吸光度变化,间接反映PAL活性,适用于细胞代谢研究中对PAL活性的快速评估。

    应用领域

    本试剂盒主要用于细胞代谢研究,适用于植物细胞、微生物及悬浮细胞系等样本,帮助研究者探索苯丙烷类次生代谢通路、植物抗逆机制及细胞代谢调控网络。

    苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

    产品参数

    中文名称 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
    英文名称 CheKine™ Micro Phenylalanine Ammonia Lyase (PAL) Activity Assay Kit
    产品货号 KTB1160
    检测类型 氨基酸代谢
    检测方法 比色法
    试剂盒组分 • Extraction Buffer
    • Assay Buffer
    • Substrate
    • HCl
    分子 PAL
    检测指标 PAL
    注意事项 • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。
    • 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
    • 混合或复溶组分时,避免产生气泡。
    • 实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。
    保存建议 收到货后,请避光保存于4℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件,自发货之日起,按照推荐的保存条件,有效期为6个月。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

    自备耗材

    • 酶标仪或紫外分光光度计(能测 290 nm 处的吸光度)
    • 96 孔 UV 板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
    • 恒温箱,低温离心机
    • 去离子水
    • 匀浆器

    试剂准备

    Extraction Buffer:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

    Assay Buffer:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

    Working Substrate:临用前配制,加入去离子水充分溶解(48 T 的试剂盒需要 2.4 mL 去离子水;96 T 试剂盒需要 4.8 mL 去离子水),未用完的已溶解的 Substrate 可 4℃保存一周。

    HCl:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

    注意:本试剂盒组分均有一定的刺激性,建议在使用过程中做好个人防护。

    样本制备

    按照组织质量(g):称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL Extraction Buffer,进行冰浴匀浆。10,000 g,4℃离心 10 min,取上清,置冰上待测。

    注意:如需测定蛋白浓度,推荐使用 Abbkine货号:KTD3001的蛋白质定量试剂盒(BCA法)进行样本蛋白质浓度测定。

    实验步骤

    1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 290 nm,紫外分光光度计用去离子水调零。
    2. 96 孔 UV 板或微量石英比色皿中按顺序加入下列试剂:
    试剂测定孔(μL)空白孔(μL)
    样本50
    Assay Buffer145150
    Working Substrate4040

    混匀,30℃反应 30 min

    试剂测定孔(μL)空白孔(μL)
    HCl1010

    3. 混匀,静置 10 min 后,290 nm 处记录测定孔吸光值 A1和空白孔吸光值 A2,ΔA=A1-A2。

    注意:空白孔只需做一个。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果 ΔA小于 0.001可适当加大样本量。如果 ΔA大于 0.5,样本可用 Extraction Buffer进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

    结果计算

    注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

    A. 使用 96 孔板测定的计算公式

    1. 按样本鲜重计算

    单位的定义:每 g 组织在反应体系中每 min 使 290 nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。

    PAL (U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷0.05÷T=26.67×ΔA÷W

    2. 按样本蛋白浓度计算

    单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 290 nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。

    PAL (U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷0.05÷T=26.67×ΔA÷Cpr

    B. 使用微量玻璃比色皿测定的计算公式

    1. 按样本鲜重计算

    单位的定义:每 g 组织在反应体系中每 min 使 290 nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。

    PAL (U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷0.1÷T=13.33×ΔA÷W

    2. 按样本蛋白浓度计算

    单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 290 nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。

    PAL (U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷0.1÷T=13.33×ΔA÷Cpr

    V 反总:反应体系总体积,200 µL;V 样:加入样本体积,5 µL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;W:样品质量,g;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。

    常见问题

    Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多?

    A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。

    Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证?

    A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗?

    A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。

    Q: 该类试剂盒使用量应如何计算?

    A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗?

    A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    文献引用

    请等待最新文献信息更新。

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