线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1850
Price: 1798 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Mitochondrial complex I Activity Assay Kit

产品货号

KTB1850

产品特点：

专为植物组织、动物组织及培养细胞等样本设计，覆盖多种实验体系。

采用微量比色法，节省样本与试剂，适配高通量需求。

提供完整的样品制备流程与结果计算公式，降低实验门槛。

组分独立分装，避免交叉污染，确保批次稳定性。

选择规格

48 T/48 S

¥1798

现货（当天发货）

96 T/96 S

¥2198

现货（当天发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的CheKine™ 线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可快速、准确地测定植物组织、动物组织及培养细胞等样本中线粒体呼吸链复合体Ⅰ（NADH-CoQ 还原酶）的酶活性，为细胞代谢与氧化磷酸化研究提供可靠数据。

线粒体呼吸链复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3），又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，是线粒体内膜上最大的蛋白复合物，广泛存在于动物、植物、微生物及培养细胞中。该酶催化 NADH 将一对电子传递给辅酶 Q（CoQ），同时使 O₂ 还原生成超氧阴离子（O₂·⁻），成为呼吸电子传递链（ETC）中活性氧（ROS）生成的主要位点。通过测定复合体Ⅰ活性，可同时评估 ETC 功能状态与 ROS 生成水平，为研究细胞能量代谢、氧化应激及相关疾病机制提供关键指标。

应用领域

适用于细胞代谢、氧化磷酸化、线粒体功能评估、活性氧（ROS）生成机制研究，以及药物筛选、疾病模型构建等细胞分析场景。

产品参数

中文名称	线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Mitochondrial complex I Activity Assay Kit
产品货号	KTB1850
检测类型	氧化磷酸化
检测方法	比色法
试剂盒组分	• ReagentⅠ • Reagent Ⅱ • Reagent Ⅲ • Reagent Ⅳ • Reagent Ⅴ • Reagent Ⅵ
分子	Mitochondrial complex I
检测指标	Mitochondrial complex I
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 •混合或复溶组分时，避免产生气泡。 •勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 •为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1.5）或ΔA大于 0.4，可用Reagent Ⅱ稀释样本后再测定，计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA 偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。 •样本蛋白浓度需自行测定。
保存建议	收到货后，请参阅说明书中各个组分的存储条件进行保存，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪或紫外分光光度计（能测 340 nm处的吸光度）
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔 UV板或微量石英比色皿
可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器或研钵

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
ReagentⅠ	48 T: 60 mL 96 T: 60 mL×2	4℃
ReagentⅡ	48 T: 12 mL 96 T: 24 mL	4℃
ReagentⅢ	48 T: 1 mL 96 T: 2 mL	4℃，避光保存
ReagentⅣ	48 T: 12.5 mL 96 T: 25 mL	-20℃，避光保存
ReagentⅤ	48 T: 0.5 mL 96 T: 1 mL	-20℃，避光保存
ReagentⅥ	48 T: Powder×1 vial 96 T: Powder×1 vial	-20℃，避光保存

试剂准备

ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅢ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Working ReagentⅥ：临用前配制，48 T加入 1 mL去离子水充分溶解，96 T加入 2 mL去离子水充分溶解，未用完的已溶解的 ReagentⅥ请分装后-20℃避光保存 1个月，避免反复冻融。

工作液的配制：临用前配制，将 Reagent Ⅳ和 ReagentⅤ以 99:1充分混匀，根据用量，现用现配。如果检测样本是哺乳动物来源，请置于 37℃孵育 5 min；如果样本是其他物种，则置于 25℃，孵育 5 min。

注意：Reagent Ⅳ有毒性，Reagent Ⅴ有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，以保证酶的活力。

线粒体呼吸链复合体Ⅰ的提取：

准确称取 0.1 g组织或收集 500万个细胞，加入 1 mL ReagentⅠ和 10 µL Reagent Ⅲ，用匀浆器或研钵冰浴匀浆；
离心匀浆液，600 g，4℃离心 5 min，收集上清液至另一新的离心管中，舍弃沉淀；
再次离心上清，11,000 g，4℃离心 10 min，沉淀即为提取的线粒体，用作第 5步操作；
(选做)上清液即为胞浆提取物，可作为样本用于测定从线粒体泄漏的线粒体呼吸链复合体Ⅰ（此步可选做，可用于判断线粒体提取效果）；
在沉淀中加入 200 µL ReagentⅡ和 2 µL ReagentⅢ，充分重悬沉淀，用于下一步线粒体呼吸链复合体Ⅰ酶活性检测。

实验步骤

酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 340 nm，紫外分光光度计用去离子水调零。
在 96孔 UV板或微量石英比色皿中依次加入 10 µL样本、200 µL工作液和 15 µL Working ReagentⅥ，充分混匀后，立即读取 340 nm处 0 min 初始吸光值 A1和 2 min后的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：

（1）为保证实验结果的准确性，需先取 1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1.5）或ΔA大于 0.4，可用 Reagent Ⅱ稀释样本后再测定，计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高检测数值，若ΔA出现负值，则说明样本中不含复合体Ⅰ或已降解。

（2）线粒体呼吸链试剂盒是酶动力学原理的试剂盒，反应比较快，且反应趋于平衡之后，该可逆反应可能会出现负反应，建议如下：

样本组数：2-3个左右，该酶促反应速度快，且为酶促反应，需要把握好起始时间点和反应后的时间点；
仪器提前预热，且加样可安排在酶标仪旁边进行，加样混匀后直接放入；
如果ΔA偏小，可增加样本量（组织克重或者细胞数量），或者减少提取液用量；
样本尽量新鲜提取，如果不能马上使用，则把完整细胞或者分装的组织保存在-80℃，一个月内使用；
工作液临用前配制。
该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB1860、KTB1870、KTB1880、KTB1890的测定。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

A. 使用 96孔 UV板测定的计算公式

1. 按样本鲜重计算

单位的定义：每 g组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

上清中线粒体呼吸链复合体Ⅰ活力的计算

上清的复合体Ⅰ活力(U/g 鲜重)=[ΔA 上清×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷V 提取×V 样)÷T=3,654×ΔA 上清÷W

沉淀中线粒体呼吸链复合体Ⅰ活力的计算

线粒体沉淀的复合体Ⅰ活力(U/g 鲜重)=[ΔA 沉淀×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷V 重悬×V 样)÷T=731×ΔA 沉淀÷W

样本中复合体Ⅰ总活力的计算

复合体Ⅰ总活力即为上清中复合体 I 活力与沉淀中复合体 I 活力之和。

复合体Ⅰ总活力(U/g 鲜重)=3,654×ΔA 上清÷W+731×ΔA 沉淀÷W

2. 按细胞密度计算

单位的定义：每 1万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅰ活力(U/10⁴ cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 重悬×500)÷T=1.46×ΔA

参数说明：

V 反总：反应体系总体积，2.25×10^-4 L
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm
d：96孔 UV板光径，0.5 cm
10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹ nmol
V 样：加入样本体积，0.01 mL
T：反应时间，2 min
ΔA 上清：上清测定值
W：样本重量，g
V 提取：提取体系体积，1.01 mL
ΔA 沉淀：沉淀测定值
V 重悬：重悬沉淀体积，0.202 mL
500：细胞总数, 500万

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中的光径 d:0.5 cm调整为 d:1 cm进行计算即可。

常见问题

Q: 如果检测样本是哺乳动物来源，请置于 37℃孵育 5 min，如果不立即做实验，怎么保存?

A: 可以放在37℃保持温度，实验前再拿出来加样

Q: 可以先把所有样本的 200 µL工作液和 15 µL L Working ReagentⅥ 提前配成混合液吗？

A: 不可以，需要按照说明书的先后顺序依次加入 10 µL 样本、200 µL 工作液和 15 µL Working ReagentⅥ，一个孔一个孔加样

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

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