晚期氧化蛋白产物(AOPP)检测试剂盒(微量法)-CheKine™

自备耗材

• 酶标仪或紫外分光光度计（能测 340 nm处的吸光度）
• 96孔 UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
• 制冰机、低温离心机、水浴锅
• 去离子水
• 匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer (1×)：临用前配制，用去离子水按 1:9稀释至 1×，混匀备用。

ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Standard：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Working AOPP-HSA Positive Control：临用前配制，用 Extraction Buffer (1×)按 1:19稀释，混匀备用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Working Free-HSA Negative Control：临用前配制，用 Extraction Buffer (1×)按 1:19稀释，混匀备用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

标准曲线设置

按照如下表格，用去离子水将 1,000 µmol/L标准品稀释为 100、80、60、40、20、10、5 µmol/L的标准溶液。

样本制备

1. 细胞：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每 500万个细胞加入 1 mL Extraction Buffer (1×)，超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），13,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
2. 动植物组织：称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction Buffer (1×)，进行冰浴匀浆，13,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
3. 血清和血浆：用 Extraction Buffer (1×)稀释 5倍后直接检测。

实验步骤

1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 340 nm。紫外分光光度计用去离子水调零。

2. 96孔 UV板或微量石英比色皿中按顺序加入下列试剂：

混匀，37℃孵育 5 min，记录 340 nm处的吸光值，计算测定孔ΔA 测=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白，阳性对照孔ΔA 阳对=A 阳对-A 空白和阴性对照孔ΔA 阴对=A 阴对-A 空白。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 以各标准品浓度为 y轴，ΔA 标准为 x轴，做标准曲线得到方程，将ΔA 测带入方程，得到 y (µmoL/L)。

2. 样本中 AOPP浓度计算

(1) 按照蛋白浓度计算

(2) 按照样本质量计算

(3) 按照血清和血浆计算

(4) 按照细胞密度计算

V 样：加入反应体系中样本体积，0.2 mL；V 提取：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞总数，500万；n：样品稀释倍数。