细胞侵袭分析试剂盒(24孔板,8μM)

Name: 细胞侵袭分析试剂盒(24孔板,8μM)
Brand: Abbkine
SKU: KTA5011
Price: 2998 CNY
Availability: InStock

Cell Invasion Assay Kit (24 well,8μM)

产品货号

KTA5011

产品特点：

预铺Matrigel的24孔侵袭板，开盒即用，省去基质胶铺板步骤

配套完整的固定液、染色液与洗脱液，实验流程优化至3步完成

8 μm孔径聚碳酸酯膜适配多种细胞类型，可精准检测细胞侵袭能力

选择规格

12 T

¥2998

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12 T×4

¥6498

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的细胞侵袭分析试剂盒（24孔板，8 μM）（Cell Invasion Assay Kit, 24 well, 8 μM）是一套基于改良Boyden小室原理、预铺Matrigel基质的即用型系统，可在标准24孔板内快速评估细胞穿越基底膜屏障的侵袭能力，广泛适用于贴壁或悬浮细胞的体外侵袭实验。

细胞侵袭是细胞在趋化信号驱动下，分泌蛋白酶降解细胞外基质并穿越基底膜向新区域迁移的过程，常见于伤口愈合、胚胎发育、血管生成及肿瘤转移等生理病理场景。本试剂盒通过在聚碳酸酯膜上预铺8 μm孔径并覆盖Matrigel，模拟体内基底膜结构；当细胞被加入上层小室后，侵袭能力强的细胞可降解Matrigel并穿越膜孔，最终经固定、染色、洗脱后，通过比色或显微镜计数定量分析侵袭细胞数量，为研究细胞迁移机制及药物干预效果提供可靠工具。

应用领域

本试剂盒专为细胞状态分析设计，适用于肿瘤转移机制研究、药物筛选、细胞外基质相互作用探索及组织工程细胞功能评价等细胞水平实验。

产品参数

中文名称	细胞侵袭分析试剂盒(24孔板,8μM)
英文名称	Cell Invasion Assay Kit (24 well,8μM)
产品货号	KTA5011
试剂盒组分	•24-Well Invasion Plate •Fixation Solution •Staining Solution •Elution Solution •Matrigel
保存建议	请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期最少6个月。
运输条件	干冰运输或冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

侵袭性细胞系
10%胎牛血清的细胞培养基
无血清培养基（即 0%胎牛血清的细胞培养基）
细胞培养箱（37℃，5% CO2）
PBS、棉签、镊子、96孔板、24孔板、可调节式移液枪及枪头
显微镜
酶标仪（能测 570 nm处的吸光度）

试剂准备

24-Well Invasion Plate：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Matrigel：4℃解冻；使用前置于冰上，用不完的试剂-80℃分装保存。
Fixation Solution：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
Staining Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Elution Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

实验步骤

注意：正式实验之前，一定要进行预实验，确定细胞侵袭的最佳实验条件。细胞必须有分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的能力，才能进行细胞侵袭。建议实验前进行 qPCR预实验检测 MMPs的表达，特别是 MMP-2的表达。

准备基质胶：将枪头、枪头盒、EP管、无血清培养基与 24-Well Invasion Plate放入冰箱预冷。Matrigel从-80℃拿出，4℃解冻 Matrigel，融化后置于冰盒操作实验。
注意：Matrigel形成凝胶之前，全程用预冷的无菌枪头混匀，Matrigel融化后为澄清的液体。
稀释基质胶：在超净工作台中用预冷的无血清培养基稀释Matrigel。
注意：（1）根据实验条件选择 Matrigel合适的稀释比例，稀释比例设置范围为Matrigel：无血清培养基=1:6-1:8，建议稀释比例为 1:6。（2）稀释后未用完的 Matrigel不建议保留再用。
预冷的无菌枪头吸取 45 µL稀释后的 Matrigel，加入 24-Well Invasion Plate上室中，均匀平铺在底部，放入细胞培养箱（37℃，5% CO2）中孵育 1 h，使 Matrigel聚合成凝胶，依据凝胶成膜的实际效果，孵育时间可适当延长。
注意：铺胶过程不要产生气泡，均匀铺胶。一般孵育 1 h即可凝胶，凝胶后很难看清，可直接做下一步实验。
将上室中多余液体吸掉，在每孔中加入 100 µL无血清培养基后，于培养箱放置 30 min，进行基底膜水化。
将上室中液体吸掉，检查液体没有穿过小室进入到下室后，接种细胞。
注意：若有液体进入下室，可能实验结果会不准确，建议重新铺胶。
用无血清培养基将细胞稀释至 0.5-5.0×10⁶个细胞/mL，制备细胞悬液。
注意：做细胞侵袭前，建议细胞饥饿过夜。
在下室中加入 600 µL含有 10%胎牛血清或所需化学引诱剂的培养基，然后加小室润湿，在上室中加入 100 µL的细胞悬液。
注意：（1）上室和下室的溶液一定不要产生气泡，这样侵袭作用会减弱；（2）细胞状态很关键，尽量选用传代次数较少的细胞。
在细胞培养箱（37℃，5% CO2）中培养 12-48 h。
注意：过长的培养时间可能会导致部分侵袭的细胞从膜底面脱落，建议通过预实验选择合适的培养时间。
小心地取出小室，吸出上室中的培养基，用湿棉签的末端轻轻擦去上室未侵袭的细胞。
注意：擦去上室未侵袭的细胞，动作一定要轻柔，不要刺破聚碳酸酯膜。
将小室转移到含有 600 µL Fixation Solution孔中，室温固定 10 min，PBS清洗 3次。
再将小室转移到含有 600 µL Staining Solution孔中，室温染色 5-15 min，PBS清洗 3次，每次 3 min，晾干。（若小室仍有较深着色，建议在装有 PBS的烧杯中轻轻清洗小室 3次，晾干）。
注意：环境温度和试剂温度均会对染色所需时间产生影响，但较短的染色时间只对着色的深浅造成影响，如果颜色较浅可适当加温或延长染色时间来达到所需的染色效果，在 37℃浸染 15 min可保证充分着色。
小室放在干净孔中，显微镜选择至少 3个视野观察并拍照，计算侵袭细胞数量。
拍完照后，在下室中加入 400 µL Elution Solution，洗脱 10 min，将 Staining Solution完全洗脱下来，吸取洗脱后的溶液 200 µL到 96孔板中，在 570 nm处测量 OD值。
注意：（1）通常在 22-28℃的室温环境下，需要 10 min完成洗脱，可依据温度的差异适当调整洗脱时间。（2）可依据具体实验需求选择染色拍照和测量 OD值。