增殖系列|解开细胞增殖的“密码”

细胞增殖可用于评估正常细胞的健康状况、测定对毒性损伤的反应或用作多种癌症的预后和诊断工具。因此，细胞增殖检测成为科学工作们的热门话题。通过这篇文章，小编将会为大家打开细胞增殖的密码。

图1. 细胞增殖示意图

 细胞增殖检测的标志物通常取决于DNA 平或合成、细胞代谢或增殖特异性蛋白。在实际操作中，科研工作者们常常遇到各种各样的难点：

1、增殖检测突破口在哪里：市面上的增殖检测产品很多，检测方式多样，不知如何选择；

2、增殖检测实验操作复杂：传统的细胞增殖试剂盒操作步骤多，且时间长，实验条件难把控；

3、细胞增殖不同检测方式的应用存在差异，如何匹配自己的实验样本和研究专题

在小编持续不断地信息收集下，我们汇总了多个细胞增殖检测的常用方法，包括下表：

1、CCK8试剂盒运用比色法操作简便快捷，直观，数据可靠。CCK8 检测法是 MTT 检测法的升级版。CCK8 检测试剂中含有 WST-8，WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，可被线粒体内的脱氢酶还原生成水溶性的甲臜。细胞增殖越多越快，颜色越深。酶联免疫检测仪测定 450nm 吸光度。

图2. CCK8检测示意图

2、EdU 是一种胸腺嘧啶核苷类似物，在细胞增殖时能够插入正在复制的 DNA 分子中。基于 EdU 与荧光染料的特异性反应检测 DNA 复制活性。现多用 EdU 检测替代 BrdU 检测。与传统的BrdU相比,EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，因而在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。而BrdU需要变性DNA后才能与抗体结合，破坏了DNA双链结构，影响了Hochest等染色，导致染色弥散，准确性降低等问题，逐渐被EdU取代。

图3. BrdU和EdU检测增殖对比图

图4. Hela细胞用EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（橙色荧光）检测结果图

3、 PCNA（Prol EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（橙色荧光）iferating Cell Nuclear Antigen）是增殖细胞相关的核抗原，在 DNA 复制以及细胞增殖的启动中起重要作用。Ki67 也是一种细胞增殖核抗原，在有丝分裂中维持 DNA 结构的稳定性，在细胞周期 G0 期无表达，G1 期开始表达，S 期和 G2 期表达量逐渐升高，M 期表达量最高，有丝分裂结束后则降解消失。WB 实验可对 PCNA 或 Ki67 的表达水平进行检测，从而间接得知细胞增殖情况。

图5. 人乳腺癌组织用PCNA小鼠单克隆抗体（1D7）做免疫组化IHC的结果图

4、ATP是细胞的能量直接来源，因此通过检测细胞中ATP的含量可以直接反应细胞的增殖、毒性状态。

图6. ATP含量检测细胞增殖的反应原理图。

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