特大喜讯|Abbkine代理abm永生化细胞

衰老死亡是一种正常的不可逆的细胞生理过程，细胞在不断增殖分裂的过程中会到达衰老期M1期和致死期M2期。细胞会停止分裂并启动凋亡程序。此时如果细胞在某些原因诱导下， 恢复基因的稳定性，则可以逃离衰老死亡的正常生理过程达到无限增值分裂的永生化状态。除干细胞、生殖细胞外，大部分真核生物细胞都具有该特性。例如人上皮细胞在分裂40至60代后就会停止生长，产生 DNA 合成蛋白抑制因子，保证 DNA 复制和染色体分配质量的检查机制就会发送细胞周期停止信号,阻止DNA合成，细胞不再分裂并开始衰老，而病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等则可越过衰老期而进入增长抑制状态，即危机期(M2期) 。细胞在该周期中会逐渐出现退化、死亡的现象；只有罕见的细胞在某些因素的作用下可以激活端粒酶。为了补充或延长端粒，维持端粒长度，这些细胞以自身 ＲNA 为模板合成端粒 DNA， 从而维持染色体的稳定性，使细胞可以顺利跳过M2期，从而获得无限分裂增殖的能力，最终发生细胞永生化。

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永生化细胞指体外培养细胞经过自发的或受外界因素的影响而从增殖危机中逃逸，细胞获得持续生长增殖能力的特性。永生化的细胞具有无限增殖生长性，可长期传代，并多伴有核型改变。

永生化细胞系应用价值及意义

1）永生化细胞稳定均一，性状一致，是体外研究增殖、分化、凋亡、衰老等生物学过程的理想模型；

2）可使得传代困难，增殖困难、易衰老的细胞获得永生，并且永生化的细胞壁原代细胞易于培养，因为它们生长能力更强可以获得更多的细胞资源，也节省了分离细胞的周期，降低反复分离原代细胞的成本；

3）永生化的下拨和肿瘤细胞密切相关，是研究肿瘤发生机制的重要细胞模型；

4）永生化细胞可建立稳定的细胞库，遗传相同的种群，有助于提供一致且可复制的实验结果。

如何诱导细胞永生化？

① SV40的大T抗原

SV40大T抗原能使细胞进入永生化的增殖状态，通过将SV40大T抗原片段整合入靶细胞9的细胞核内，使其表达来构建永生化细胞系9，这是目前构建永生化细胞广泛使用的一种方式。

②人端粒酶逆转录酶”(human telomerase reverse transcriptase,hTERT

hTERT是人端粒酶蛋白质部分的催化亚基编码基因，与端粒酶活性9呈现正相关。研究表明，由病毒介导的hTERT的表达能激活正常细胞“端粒酶的表达，进而导致端粒DNA的增长和细胞生命周期的延伸。hTERT的激活是细胞永生化的重要步骤。

③人乳头瘤病毒的E6蛋白(HPV16 E6)

HPV通过病毒编码蛋白与宿主细胞的调节蛋白形成复合物，破坏细胞的有丝分裂和DNA修复过程从而引起细胞转化。HPV16的E6蛋白是一种多功能蛋白，可通过激活端粒酶而使正常细胞永生化

④原癌基因c-Myc、RAS、c-fos等

研究表明，原瘟基因c-MvC、RAS、c-fos、Bmi1、CDK4等均能激活端粒酶的活性，进而参与细胞永生化的过程。

⑤抑癌基因p53、p21、pRb等

细胞永生化过程中伴随着很多抑癌基因的灭活，如促进细胞老化“的p53、p21、pRb等，研究表明，p53、p21、pRb等的失活，可能协同端粒酶的激活，促进细胞永生化。

永生化细胞与原代细胞对比

永生化工作流程概述

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