【干货分享】细胞因子活性验证方法

细胞因子作为重要的蛋白药物，可以通过原核表达和真核表达纯化系统得到。蛋白纯化后的生物学活性是检测蛋白功能的重要指标，对蛋白的后续应用有重要影响。测定细胞因子生物学活性的方法可分为细胞增殖和增殖抑制法、细胞毒活性测定法、抗病毒活性测定法、趋化活性测定法、ELISA法等，不同的细胞因子生物学活性检测的方法不同。

1.促进细胞增殖和增殖抑制法:

检测细胞因子促生长活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间，然后检测细胞增殖数。前者的增殖细胞数与细胞因子的含量成正比，而后者的增殖细胞数与细胞因子的含量成反比。常用的检测细胞增殖的方法有比色法、染色法和直接计数法等。比色法包括MTT、XTT、MTS和NAG等方法，可在酶标检测仪上自动化检测，较为常用

2.细胞毒活性测定法:

许多细胞因子针对转化的细胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制细胞生长的作用。检测细胞因子溶细胞/细胞毒活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间，然后用比色法检测存活的靶细胞数，并与对照比较求得溶细胞或抑制细胞生长的百分率，或以OD值对样品稀释度作图，绘制标准品的剂量反应曲线，从曲线上求得引起相应反应的待测样品

3.抗病毒活性测定法：

检测样品中干扰素含量的常用方法，其检测原理是用细胞因子样品处理易感细胞，使细胞建立抗病毒状态，然后用适量病毒攻击细胞，评价病毒的复制量或病毒引起细胞病变的程度即可判断样品中细胞因子的生物活性。检测抗病毒活性的具体方法包括测定细胞因子抑制病毒的致细胞病变效应（CPE）、抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量等。

4.趋化活性测定法:

多种细胞因子具有趋化活性，能诱导细胞定向迁移。趋化因子诱导细胞移动的方式包括趋化性和化学增活现象。趋化性（chemotaxis）是指诱导细胞向趋化因子化学浓度高的方向作定向移动，化学增活现象（chemokinesis）是指增强细胞的随机运动。趋化性可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验测定，化学增活可采用琼脂糖小滴化学动力学试验检测。

5.ELISA测定法：

依据抗原抗体反应测定样品中细胞因子含量，常用的有夹心法、竞争法等。

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