总膜蛋白提取试剂盒-ExKine™

Name: 总膜蛋白提取试剂盒-ExKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTP3004
Price: 816 CNY
Availability: InStock

ExKine™ Total Membrane Protein Extraction Kit

产品货号

KTP3004

产品特点：

多用途：兼容新鲜哺乳动物细胞与组织，几乎无细胞器交叉污染。

方便快捷：非变性体系，活性蛋白可在 2 小时内完成提取。

兼容性好：所得膜蛋白可直接用于 Western Blot、蛋白分析及酶活力测定等多种下游实验。

选择规格

50 T

¥816

现货（次日发货）

200 T

¥2016

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

ExKine™ 总膜蛋白提取试剂盒 (ExKine™ Total Membrane Protein Extraction Kit) 是一款专为快速、温和地分离哺乳动物细胞或组织总膜蛋白而设计的即用型试剂盒。通过优化的非变性缓冲体系，可在 2 小时内 获得高纯度、几乎无细胞器交叉污染的膜蛋白组分，为后续功能与结构研究奠定可靠基础。

膜蛋白在信号转导、物质运输、细胞识别等生命活动中扮演核心角色。然而，膜蛋白固有的疏水性使其提取难度远高于可溶性蛋白。传统方法常伴随变性、得率低或细胞器污染等问题。ExKine™ 总膜蛋白提取试剂盒通过温和的膜蛋白提取缓冲液与高效洗涤液协同作用，选择性裂解细胞膜并去除胞质及核蛋白污染，同时加入 100× 蛋白酶抑制剂，最大限度保持蛋白活性与天然构象，为 Western Blot、免疫沉淀、酶活测定及蛋白质纯化提供理想起始材料。

应用领域

细胞器提取与染色、膜蛋白功能研究、信号通路分析、药物靶点验证、膜蛋白相互作用筛选等细胞分析相关实验。

产品参数

中文名称	总膜蛋白提取试剂盒-ExKine™
英文名称	ExKine™ Total Membrane Protein Extraction Kit
产品货号	KTP3004
试剂盒组分	• Extraction Buffer (2×) • Wash Buffer (2×) • Protease Inhibitor (100×)
注意事项	开始实验前，请确保所有试剂和溶液处于合适的温度。
保存建议	请参考说明书中提及的各个试剂的保存条件。自发货之日起，根据推荐的保存温度，最少稳定1年。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

涡旋仪、离心管
细胞刮刀
可调节式移液枪及枪头
磷酸盐缓冲液(PBS)、去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

Working Extraction Buffer (1×)：使用前，用去离子水稀释成 1× Extraction Buffer，立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×) 到 1 mL 1× Extraction Buffer 中，置于冰上；4℃保存。

Working Wash Buffer (1×)：使用前，用去离子水稀释成 1× Wash Buffer，立即加入 10 µL Protease Inhibitor (100×) 到 1 mL 1× Wash Buffer 中，置于冰上；4℃保存。

Protease Inhibitor (100×)：即用型；使用前，置于冰上；-20℃保存。用不完的试剂分装保存，避免反复冻融。

试剂盒组分

组分	规格	储存条件
Extraction Buffer (2×)	25 mL (50 T) / 100 mL (200 T)	4℃
Wash Buffer (2×)	15 mL (50 T) / 60 mL (200 T)	4℃
Protease Inhibitor (100×)	0.8 mL (50 T) / 3.2 mL (200 T)	-20℃

实验步骤

注意：所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

I 细胞培养物的制备

对于贴壁细胞，用细胞刮刀收获 1-3×10⁷ 个细胞，然后 500 g 离心 5 min。对于悬浮细胞，500 g 离心 5 min。
用预冷的 PBS 重悬细胞沉淀，500 g 离心 2-3 min，弃上清。
向细胞沉淀中加入 1 mL 预冷的 1× Working Extraction Buffer 后，用匀浆器匀浆细胞 30-50 次，继续步骤 III。

II 组织制备

将 50-100 mg 组织切成小块，放入离心管中。
用预冷的 PBS 清洗组织，500 g 离心 5 min，弃上清。
用 1 mL 预冷的 1× Working Extraction Buffer 轻柔重悬组织。
使用匀浆器或组织研磨机匀浆组织，直至超过 90% 的细胞被破坏，细胞核在显微镜下可见，继续步骤 III。

III 膜疏水和亲水蛋白的分离

将裂解物放置于冰上 10 min。

注意：如果有需要，可以保存 50-100 µL 总蛋白质裂解物，做进一步分析。

10,000 g，4℃离心 5 min。
将上清液转移到新的离心管中并弃掉沉淀，上清在 37℃孵育 5 min，直至变浑浊，在孵育期间，上下颠倒离心管。
3,000 g，室温离心 3 min。

注意：确保离心机的温度高于 20℃，不要将离心后的管放到冰上。离心后注意观察液体分层，离心后的溶液必须有明显分层，否则重复该步骤。上层液体为亲水相（胞浆蛋白），下层呈粘稠油状为疏水相，含疏水蛋白（膜蛋白）。

下层疏水相极大的富集了疏水蛋白，将上层包含亲水蛋白的亲水相转移到新的离心管做进一步分析。
为了从疏水相中去除残留的亲水蛋白，加入 400 µL 1×Working Wash Buffer 到疏水相，轻柔混匀，冰上孵育 10 min，重复步骤 3-5。
如果无需立即进行下游实验，分装膜蛋白，并迅速冷冻后，储存于 -80℃。
对于 SDS-PAGE：直接使用分离的膜蛋白煮沸后进行电泳。对于 IP实验：在加入抗体前，可用 10-15 倍的 1×Working Wash Buffer 先稀释疏水蛋白。

注意：如果需要，可以通过 TCA 沉淀样品以获得更浓缩的样品。