辣根过氧化物酶偶联试剂盒-LinKine™

自备耗材

• 待标记样本
• 移液器和吸头
• 去离子水
• 超滤管或透析袋（按照实验需求）

样本制备

待标记样本的缓冲液应满足如下要求：

注意，缓冲液中不能含有氨基成分，会影响偶联效果。叠氮化钠会破坏HRP，偶联缓冲液不能含有普罗克林，少量BSA和明胶不影响偶联效果，建议使用PBS作为缓冲液。若样本中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS置换缓冲液，具体方法为：将样本加入超滤管中，加入200-150 µL PBS，10,000 g，4℃、12 min离心，弃掉滤液；再次补齐PBS，10,000 g、4℃、12 min离心；离心后取出超滤管内芯，倒置于干净外管中，4,000 g、4℃、2 min离心，收集置换缓冲液后的样本。

实验步骤

1. 偶联物制备

待标记样本与HRP最佳摩尔比为1:1至1:4。我们建议以约1:3的比例进行偶联实验。您可以通过预实验确定最佳摩尔比。以标记抗体为例，从1:1至1:4推荐用量如下。

考虑到分子量（抗体：160,000；HRP：40,000），对于1 mg HRP，需要添加1-4 mg抗体。为保证偶联效果，建议样本的原始浓度应大于1 mg/mL。对于其它规格，请参阅上表进行等比放大。

以3×100 µg/Kit试剂盒为例，推荐摩尔比为1:3。其它规格，试剂用量依据说明书进行等比调整。如果需要调整摩尔比，请保持HRP量不变，更改待标记样本和缓冲液用量。

1. 向待标记样本中加入30 µL HRP labeling solution，用移液器温和混匀。
2. 吸取22.5 µL Activated HRP solution至步骤(1)反应液中，加去离子水至1 mL。温和混匀，室温（20-25℃），避光，静置2 h。
3. 向HRP quencher powder中加入1 mL去离子水制作100× HRP quencher浓缩液。HRP quencher浓缩液可置于室温保存，但需在48小时内用完。HRP quencher浓缩液在使用前需稀释100倍制成HRP quencher工作液。

注意：为了防止气体在管内聚集，瞬间膨胀，导致安全隐患，请开盖配制HRP quencher溶液；不同规格的试剂盒，配制100× quencher浓缩液的去离子水用量保持不变（1 mL）。

4. 向步骤(2)反应液中加入45 µL HRP quencher工作液，温和混匀，4℃，避光放置2 h。偶联物可直接用于下游实验。

2. 偶联物储存

偶联物在4℃避光条件下可稳定保存一个月。若需长期储存，请分装并于-20℃下避光保存，避免反复冻融，可加入同体积甘油。

常见问题

注意事项

1. 不同批次号、不同的厂家的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
2. 混合或复溶组分时，避免产生气泡。如有未使用完的试剂，请及时密封保存于4℃。
3. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
4. 保持好的实验习惯，穿戴好手套、实验服、口罩、防目镜等防护工具后再开始实验。