通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗兔Dylight 594)

Name: 通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗兔Dylight 594)
Brand: Abbkine
SKU: KTD109
Price: 498 CNY
Availability: InStock

Universal IF Toolkit (Anti-Rabbit Dylight 594)

产品货号

KTD109

产品特点：

组分完整：包含通透、修复、封闭、稀释、洗涤、封片等全部所需试剂，开盒即可实验。

信号持久：SuperKine™增强型抗荧光淬灭剂有效抑制光漂白，延长红色荧光信号寿命。

高亮二抗：Dylight 594标记的山羊抗兔IgG，荧光强度高、光学耐受性佳，信噪比优异。

多色兼容：红色通道与FITC、DAPI等常用染料光谱分离良好，支持多重荧光共定位。

选择规格

100 T

¥498

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

通用型免疫荧光（IF）工具箱（抗兔Dylight 594）是一款专为免疫荧光（IF）实验设计的即用型试剂组合，内置Dylight 594标记的山羊抗兔IgG，可直接与兔源一抗配合，在蛋白水平上对细胞或组织切片进行红色荧光成像，实现从样本通透、抗原修复、封闭、抗体孵育到封片的全流程覆盖。

免疫荧光技术（IF）利用抗原-抗体特异性结合，将荧光染料标记在抗体上，通过荧光显微镜观察目标蛋白在细胞或组织中的定位与表达。本工具箱以Dylight 594作为荧光标记，其激发/发射波长约为593/618 nm，呈现明亮红色荧光，与常见绿色、蓝色荧光通道兼容，适合多色共定位实验。试剂盒提供的EDTA抗原修复液（pH 8.0）可在温和条件下恢复抗原表位，SuperKine™增强型抗荧光淬灭剂则显著延缓荧光信号衰减，确保长时间观察的信号稳定性。

应用领域

适用于细胞爬片、石蜡/冰冻组织切片等样本的免疫荧光检测，广泛用于蛋白定位、表达分析、共定位研究，覆盖肿瘤学、神经科学、免疫学、发育生物学等基础与转化研究领域。

产品参数

中文名称	通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗兔Dylight 594)
英文名称	Universal IF Toolkit (Anti-Rabbit Dylight 594)
产品货号	KTD109
试剂盒组分	• Immunostaining Permeabilization Buffer-100 mL • EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)-100 mL • PBS (20×)-100 mL • Goat Serum Blocking Buffer-20 mL • Antibody Wash Buffer (20×)-25 mL • Antibody Dilution Buffer-50 mL • DyLight 594, Goat Anti-Rabbit IgG-100 μL • DAPI (500×)-100 μL • SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium-10 mL
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 该试剂盒中组分EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)，使用过程中请稀释至1×工作液使用，并注意调节PH至8.0。 • 产品经过严苛质量检测。欢迎随时与我们联系，我们致力于客户的成功和满意。
保存建议	-20℃，避光保存12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

固定液（4% 多聚甲醛）
一抗，荧光显微镜，组化笔
去离子水，载玻片，湿盒

试剂准备

Immunostaining Permeabilization Buffer：即用型；4℃保存。
EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0：临用前配制，用去离子水将20× EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0稀释10倍得到EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0，4℃保存。
PBS：临用前配制，用去离子水将20× PBS稀释20倍得到PBS，4℃保存。
Goat Serum Blocking Buffer：即用型；使用前平衡至室温，-20℃保存。
Antibody Wash Buffer：临用前配制；用去离子水将20× Antibody Wash Buffer稀释20倍得到Antibody Wash Buffer；4℃保存。
Antibody Dilution Buffer：即用型；用于稀释一抗和二抗；4℃保存。
DyLight 594, Goat Anti-Rabbit IgG：山羊抗兔IgG，红色DyLight 594荧光标记；推荐稀释比例1:200。
1× DAPI Staining Solution：临用前配制，用PBS将DAPI (500×)稀释500倍得到1× DAPI Staining Solution。
SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium：即用型；-20℃避光保存。

实验步骤

A. 对于石蜡切片

1. 脱蜡至水化：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 15 min，二甲苯Ⅱ 15 min，无水乙醇Ⅰ 5 min，无水乙醇Ⅱ 5 min，85%酒精 5 min，75%酒精 5 min，去离子水洗5 min。

2. 抗原修复：切片置于盛满1× EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8 min，停火8 min，转中低火5 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将切片置于PBS中在摇床上洗3次，每次3 min。

注意：修复液和修复条件根据组织来确定，最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。

3. 画圈：切片稍甩干后，用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走）。

4. 封闭：在圈内滴加一滴Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育30 min。

5. 一抗：轻甩Goat Serum Blocking Buffer，在圈内滴加用Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗，于湿盒内室温孵育1 h或4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。

注意：荧光共定位检测可先孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

6. 荧光二抗：切片置于Antibody Wash Buffer中，置于摇床上清洗2次，每次5 min，再置于PBS中，摇床上清洗1次，5 min。切片稍甩干后，在圈内滴加Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗，避光室温孵育1 h。

注意：加荧光二抗后，后续所有操作步骤都应在暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种对应的二抗进行第二轮孵育。

7. DAPI复染：切片置于Antibody Wash Buffer中，置于摇床上清洗2次，每次5 min，再置于PBS中，摇床上清洗1次，5 min。在圈内滴加1× DAPI Staining Solution，避光孵育5-10 min，吸弃未反应的1× DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。

8. 封片：用吸水纸吸干切片上的液体，用SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

B. 对于血涂片、冰冻切片和细胞爬片

1. 固定：载玻片用防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），抗凝血经离心分层后涂片；冰冻切片室温风扇吹干；细胞爬片生长。以24孔板细胞爬片为例，吸尽培养液，加入1 mL固定液，室温固定15-30 min，吸弃固定液，PBS洗3次，每次3 min。

注意：推荐使用4%多聚甲醛作为固定液，也可根据特定的一抗或样品采用有效成分为乙醇、甲醇或其它类型的固定液。

2. 破膜：加入1 mL Immunostaining Permeabilization Buffer室温孵育20 min，吸弃未反应的Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS洗3次，每次3 min。

注意：冰冻切片也可选用含20 μg/mL蛋白酶K的PBS溶液，消化15 min。

3. 封闭：吸弃PBS，加入200 μL Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育30 min。

4. 一抗：吸弃Goat Serum Blocking Buffer，加入200 μL用Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗，于湿盒内，室温孵育1 h或4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。

注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

5. 荧光二抗：吸弃一抗，加入1mL Antibody Wash Buffer，置于摇床上清洗3次，每次5 min，再加入1 mL PBS，置于摇床上清洗1次，5 min。吸弃PBS，加入200 μL用Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗，避光室温孵育1 h。

注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换下一种对应的二抗进行第二轮孵育。

6. DAPI复染：吸弃二抗，加入1mL Antibody Wash Buffer在摇床上洗2次，每次5 min，再加入1 mL PBS在摇床上洗1次，5 min。吸弃PBS，加入500 μL DAPI Staining Solution避光孵育5-10min，吸弃DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。

7. 封片：滴一滴SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

C. 对于非贴壁细胞

1. 收集细胞：300 g离心5 min，收集细胞，吸弃上清后轻轻弹散细胞。

2. 固定：加入0.5 mL固定液，轻柔悬浮细胞，室温固定15-30 min，300 g离心5 min，吸弃固定液，PBS洗3次，每次3 min。

3. 破膜：加入0.5 mL Immunostaining Permeabilization Buffer，轻柔悬浮细胞，室温孵育20 min，300 g离心5 min，吸弃Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS洗3次，每次5 min。

4. 封闭：300 g离心5 min，吸弃PBS，用100 μL Goat Serum Blocking Buffer悬浮细胞，室温封闭30 min。

5. 一抗：300 g离心5 min，吸弃Goat Serum Blocking Buffer，用100 μL Antibody Dilution Buffer稀释好的一抗重悬细胞，室温孵育1 h或4℃孵育过夜（推荐使用垂直混匀仪）。

注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

6. 二抗：300 g离心5 min，吸弃一抗，加入0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗3次，每次5 min，再加入0.5 mL PBS，清洗1次，5 min。300 g离心5 min，吸弃PBS，加入100 μL Antibody Dilution Buffer稀释好的二抗重悬细胞，避光室温孵育1 h。

注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种对应的二抗进行第二轮孵育。

7. DAPI复染：300 g离心5 min，吸弃二抗，加入0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗3次，每次5 min，再加入0.5 mL PBS，清洗1次，5 min。300 g离心5 min，吸弃PBS，加入200 μL 1× DAPI Staining Solution重悬细胞，避光孵育5-10 min，离心吸弃1× DAPI Staining Solution，PBS洗3次，每次5 min。

8. 封片：300 g离心5 min，吸弃大部分PBS，保留约50 μL液体，轻柔悬浮细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞均匀分布，稍晾干后，滴一滴SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

常见问题

Q: 该试剂盒中荧光抗体的激发波长和发射波长分别为多少？

A: 激发波长为593nm，发射波长为618nm。

文献引用

Bioinspired Composite Hydrogels with Osteogenic, Angiogenic, and Antioxidant Properties for Enhanced Bone Repair.

杂志名称: Small Structures | 作者: Gu, Guanghui, et al.

IF: 11.300 | 发表时间: 2025

Effects of exopolysaccharides form Lactobacillus plantarum KX041 on high fat diet-induced gut microbiota and inflammatory obesity.

杂志名称: International Journal of Biological Macromolecules | 作者: Yue, Fangfang, et al.

IF: 8.500 | 发表时间: 2025

NOXA exacerbates endoplasmic-reticulum-stress-induced intervertebral disc degeneration by activating apoptosis and ECM degradation.

杂志名称: Cell Death Discovery | 作者: Liu, Zhiming, et al.

IF: 7.000 | 发表时间: 2025

Ahr Deficiency Exacerbates Inflammation in Diabetic Wounds Via Impaired Mitophagy and Cgas-Sting-Nlrp3 Activation: Therapeutic Potential of Hydrogels Loaded with Ficz.

杂志名称: Available at SSRN | 作者: Wang, Yingying, et al.

IF: | 发表时间: 2025

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