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活动截止时间：2024年1月31日
通用型免疫印迹（WB）工具箱（Universal WB Toolkit，货号：KTD106）是一款专为Western Blot全流程设计的即用型试剂组合包，覆盖从样本裂解→电泳→转膜→封闭→抗体孵育→化学发光检测的全部关键步骤，帮助实验者在同一套体系中快速获得标准化、可重复的蛋白印迹结果。
免疫印迹（Western blotting）通过SDS-PAGE将复杂蛋白样品按分子量分离，随后电转移至PVDF膜，再利用特异性一抗与HRP标记二抗的级联识别，最终以高灵敏度化学发光底物显色，实现对目标蛋白的定性与半定量分析。本工具箱内置经优化的裂解液、电泳/转膜缓冲液、封闭剂、超敏ECL发光液及全套对照系统，使实验者无需额外配制试剂即可直接开展WB实验，显著降低批次间差异。
适用于细胞生物学、信号转导、肿瘤研究、药物靶点验证等需要高灵敏度、标准化Western Blot检测的科研场景，尤其适合WB/IP/Co-IP/IF相关实验的蛋白表达与互作分析。
| 中文名称 | 通用型免疫印迹(WB)工具箱 |
| 英文名称 | Universal WB Toolkit |
| 产品货号 | KTD106 |
| 试剂盒组分 | • Lysis Buffer-2 mL • Running Buffer (10×)-100 mL • Transfer Buffer (10×)-100 mL • TBST (10×)-100 mL • BSA-3 g • PVDF Membrane (8.5 cm×6 cm)-2 • SuperKine™ West Femto Maximum Sensitivity Substrate A-4 mL • SuperKine™ West Femto Maximum Sensitivity Substrate B-4 mL • WB Positive Control-40 μL • Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5)-6 μL • Colorcode Prestained Protein Marker (10-180 kDa)-5 μL • HRP, Goat Anti-Mouse IgG-3 μL • HRP, Goat Anti-Rabbit IgG-3 μL • SDS-PAGE Loading Buffer (5×)-1 mL |
| 保存建议 | 按各组分标签提示分开存储，保质期12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Lysis Buffer：变性蛋白裂解液，用于WB样本的提取，即用型；置于冰上待用；4℃保存。
1×Running Buffer：临用前配制，用去离子水将10×Running Buffer稀释10倍得到1×Running Buffer，4℃保存。
1×Transfer Buffer：临用前配制，取100 mL Transfer Buffer (10×)，加入200 mL无水甲醇混匀，加入去离子水定容至1 L，4℃保存。
1×TBST：临用前配制，用去离子水将10×TBST稀释10倍得到1×TBST，4℃保存。
注意：10×TBST、10×Running Buffer和10×Transfer Buffer浓度较高，低温等原因会导致液体中晶体析出。建议37℃水浴使其溶解后再使用。
Blocking Buffer, Primary/Secondary Antibody Dilution Buffer：临用前配制，每15 mL 1×TBST+0.45 g BSA。
WB Positive Control：即用型试剂，作为WB实验中的动物阳性样本对照。
Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5)：广泛应用的内参蛋白GAPDH的单克隆抗体，目的蛋白分子量为37 kDa；推荐稀释比例1:5,000。
Colorcode Prestained Protein Marker (10-180 kDa)：彩色预染蛋白质Marker (10-180 kDa)，包含3种颜色，总计10条蛋白质标准品（10, 17, 25, 33, 40, 53, 70, 95, 130, 180 kDa），橘色条带为70 kDa，绿色条带为10 kDa，推荐上样量2.5 μL。
HRP, Goat Anti-Mouse IgG：山羊抗小鼠IgG二抗，辣根过氧化物酶标记；推荐稀释比例1:10,000。
HRP, Goat Anti-Rabbit IgG：山羊抗兔IgG二抗，辣根过氧化物酶标记；推荐稀释比例1:10,000。
SDS-PAGE Loading Buffer (5×)：即用型；-20℃保存。
1. 细胞蛋白提取：
2. 组织蛋白提取：
3. 细菌蛋白提取：
注意：(1)蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。推荐使用BCA试剂盒用于蛋白浓度测定（货号：Abbkine KTD3001）；研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入Lysis Buffer；(2)若蛋白浓度较低，可增加起始样本的量或减少Lysis Buffer的体积；(3)若高分子量范围（100-300 kDa）蛋白条带弱，可增加Lysis Buffer的体积，确保样本裂解充分。
根据靶蛋白的分子量的大小，配制不同浓度的分离胶（下层胶），分离胶凝固后再配制5%的浓缩胶（上层胶），以下仅供参考。
| 目的蛋白分子量 | 分离胶（下层胶）浓度 |
|---|---|
| <10 kDa | 15% |
| 10-30 kDa | 12% |
| 30-70 kDa | 8% |
| >70 kDa | 6% |
在凝胶上样孔中加入样本和Colorcode Prestained Protein Marker，加入1×Running Buffer，90 V电泳约30 min待溴酚蓝电泳至分离胶后，调节电压120 V电泳至结束。
注意：预制胶需要使用专用的电泳缓冲液，不能使用本工具箱提供的Running Buffer。
PVDF Membrane在甲醇中浸泡1-2 min使其活化，然后将PVDF Membrane、滤纸和海绵垫浸泡于1×Transfer Buffer中按照黑色板（负极）-海绵垫-滤纸-凝胶-滤纸-PVDF Membrane-海绵垫-红色板（正极）制备三明治夹，排出气泡，夹紧后放入湿转电转槽内，加入1×Transfer Buffer。在冰浴条件下转膜，根据目的蛋白分子量调整转膜条件。
转膜完成后将PVDF Membrane拿出，1×TBST洗涤1 min，加入15 mL Blocking Buffer，室温摇床上孵育1 h。
1×TBST洗涤PVDF Membrane 3次，每次5 min。
按照说明书推荐稀释比稀释相应的抗体，加入15 mL稀释后的一抗，室温摇床上孵育1-2 h或4℃孵育过夜。
1×TBST洗涤PVDF Membrane 3次，每次5 min。
按照一抗种类选择合适的二抗，加入15 mL稀释后的二抗，室温摇床上孵育1-2 h。
1×TBST洗涤PVDF Membrane 3次，每次5 min。
草莓时刻：通用型免疫印迹（WB）工具箱可以便捷地检测蛋白质表达，让您的实验结果更加符合实验文献发表标准。也可用其中单品（KTD3003/BMM3001/BMU102/A21010/A21020）进行免疫印迹（WB）实验。扫描右侧二维码，关注Abbkine公众号，了解更多Abbkine产品信息。
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