土壤碱性木聚糖酶(S-BAX)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

• 酶标仪或可见光分光光度计（能测 540 nm处的吸光度）
• 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
• 水浴锅、离心机、30-50目筛
• 去离子水

试剂准备

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

注意：Reagent III 有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。

Standard：临用前配制；每瓶加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 100 μmol/mL D-木糖标准品；用不完的试剂 4℃避光保存 1个月。

10 μmol/mL D-木糖标准品：120 µL 100 μmol/mL D-木糖标准品用 1,080 µL去离子水稀释；使用 10 μmol/mL D-木糖标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：

注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜土壤样本。

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50目筛。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：

3. 混匀，90℃显色 5 min，流水冷却至室温，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 540 nm处吸光值。空白孔记为 A空白，标准孔记为 A标准，对照孔记为 A对照，测定孔记为 A测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 3 μmol/mL的ΔA 标准，上清液可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (μmol/mL)。

2. S-BAX活性的计算：

酶活单位定义：50℃，pH9.0条件下，每克土壤每小时分解木聚糖产生 1 μmol还原糖所需的酶量为一个酶活单位。

S-BAX(U/g 土样)=x×V 反总÷W÷T×F=0.1125x÷W×F

V 反总：酶促反应体积，0.225 mL；T：反应时间，2 h； W：样本质量，g；F：稀释倍数。