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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 蔗糖合成酶（SS-I）活性检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Sucrose Synthase-I (SS-I) Activity Assay Kit) 是一套基于 3,5-二硝基水杨酸显色反应的比色体系，可快速、微量地测定植物组织中蔗糖合成酶（SS-I）催化蔗糖分解方向的活性，为研究细胞代谢及碳源分配提供可靠工具。
蔗糖是植物“源”器官（如叶片）光合作用产物向“库”器官转运的主要形式。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是一种双向反应酶，既能催化蔗糖合成，也能催化蔗糖分解；其中 SS-I 活性代表其分解方向，对蔗糖降解及后续淀粉合成具有关键调控作用。本试剂盒利用 SS-I 催化蔗糖与 UDP 反应生成游离果糖和 UDPG，随后通过 3,5-二硝基水杨酸法测定生成的还原糖量，其吸光度变化与 SS-I 活性成正比，从而间接反映酶活性高低。
适用于植物生理学、作物遗传育种、细胞代谢研究等领域，帮助科研工作者评估蔗糖代谢通量、碳源分配效率及淀粉合成潜力。
| 中文名称 | 蔗糖合成酶(SS-I)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Sucrose Synthase-I (SS-I) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB3140 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent Ⅳ •Standard |
| 分子 | FBP |
| 检测指标 | FBP |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working Reagent III：临用前配制；取一支 Reagent III 加入 1.8 mL Reagent II 充分溶解待用，现配现用。
Reagent IV：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
注意：Reagent IV 有毒且有刺激性气味，Extraction有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
Standard：临用前配制；加入 1 mL去离子水溶解，配成 20 mg/mL果糖溶液备用，4℃可保存一周。
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（mg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 160 µL 20 mg/mL Standard | 240 | 8 |
| Std.2 | 120 µL 20 mg/mL Standard | 280 | 6 |
| Std.3 | 100 µL 20 mg/mL Standard | 300 | 5 |
| Std.4 | 80 µL 20 mg/mL Standard | 320 | 4 |
| Std.5 | 60 µL 20 mg/mL Standard | 340 | 3 |
| Std.6 | 40 µL 20 mg/mL Standard | 360 | 2 |
| Std.7 | 20 µL 20 mg/mL Standard | 380 | 1 |
| Std.8 | 0 | 400 | 0（空白管） |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
1. 注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
按照组织质量（g）：Extraction Buffer体积（mL）为 1: 5-10的比例（建议称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction Buffer），进行冰浴匀浆。8,000 g, 4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
注意：1. 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford法）进行样本蛋白质浓度测定。
2. 该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB3130、KTB3150、KTB3110的测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min，调节波长到 540 nm。可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中进行）：
| 试剂 | 对照管（μL） | 测定管（μL） | 标准管（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 10 | 10 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 10 |
| Working Reagent III | 0 | 40 | 0 |
| Reagent I | 40 | 0 | 40 |
| 混匀，置于 30℃准确水浴 30 min后，95℃水浴 10 min | - | - | - |
| Reagent IV | 50 | 50 | 50 |
| 混匀，95℃水浴 5 min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温（避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据，建议每次实验后冷却时间保持一致） | - | - | - |
| 去离子水 | 400 | 400 | 400 |
| 混匀，取 200 μL至微量玻璃比色皿或 96孔板，于 540 nm处测定吸光值，分别记为 A 对照、A 测定、A 标准和 A 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。 | - | - | - |
注意：标准曲线和空白只需测 1-2次，每个测定管需设一个对照管。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.1可减小稀释倍数或适当加大样本量，如果ΔA 测定大于 1.2，样本可用去 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定代入方程得到 x (mg/mL)。
2. 蔗糖酶活性的计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每 g组织每分钟催化产生 1 μg还原糖定义为一个酶活力单位。
V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；103：单位换算系数，1 mg=103 μg；T：反应时间，30 min；W：样本质量，g。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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