木质素含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

• 酶标仪或紫外分光光度计（能测 280 nm处的吸光度）
• 96孔石英板（非聚苯乙烯材质）或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
• 烘箱、40目筛、分析天平、玻璃试管、封口膜、恒温水浴锅
• 去离子水、高氯酸、冰乙酸

试剂准备

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。如有结冰，临用前 37℃水浴解冻后使用。

注意：Reagent I 有毒，Reagent I 和 Reagent III 有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

植物组织：样品 80℃烘干至恒重（大约 2 h），粉碎，过 40目筛，称取约 2 mg于 10 mL玻璃试管中（务必用玻璃试管，不可用 Ep管）。

实验步骤

1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min，调节波长到 280 nm。紫外分光光度计用冰乙酸调零。
2. 操作表（下述操作在 10 mL玻璃试管中进行）：

于 10 mL玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴 40 min，每隔 10 min震荡一次，然后自然冷却

注意：高氯酸具有强腐蚀性和刺激性，请于通风橱中谨慎操作。

充分混匀，静置 2 min

混匀，立即取 200 μL于微量石英比色皿或 96孔石英板（非聚苯乙烯材质），测定 280 nm处吸光值 A，分别记为 A 测定和 A 空白，ΔA=A 测定-A 空白。

注意：1. Reagent I 有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。
2. 加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害，若封口膜破裂，需及时用新的封口膜密封。
3. Reagent III 具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱操作。
4. 取上清加 Reagent III 步骤根据自己样品乙酰化程度，Reagent III 的用量可调整，保证吸光值在 0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。
5. 由于 Reagent III 具有挥发性，请混匀后立即测定，建议混匀一管测一管。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

A. 使用 96孔石英板（非聚苯乙烯材质）测定的计算公式如下

木质素含量 (mg/g 干重)=4.368×ΔA÷W

ε：木质素消光系数，23.35 mL/mg/cm；d: 96孔石英板（非聚苯乙烯材质），0.5 cm；V 检测：检测体积，1 mL；V 上清：吸取上清液体积，0.02 mL；W：样本干重，g；V 乙酰化：乙酰化反应体积，1.02 mL。

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中光径 d: 0.5 cm调整为 d: 1 cm进行计算即可。