买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。
活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 外切-β-1,4-葡聚糖酶（C1）活性检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro 1,4-β-D-Glucan Cellobilhydrolase (C1) Activity Assay Kit) 是一套基于 3,5-二硝基水杨酸显色反应的微量体系，可在 540 nm 处通过比色法快速、准确地测定动物组织、真菌等样本中外切-β-1,4-葡聚糖酶（C1）活性。
外切-β-1,4-葡聚糖酶（C1，EC 3.2.1.91）是纤维素酶系的重要成员，广泛存在于细菌、真菌及动物体内，负责从多聚糖链的非还原端依次切下纤维二糖和葡萄糖。本试剂盒采用微量法设计，利用 C1 催化微晶纤维素水解产生还原糖，还原糖与 3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色氨基化合物，在 540 nm 处产生特征吸收；在一定范围内，540 nm 吸光度的上升速率与 C1 活性成正比，从而实现对 C1 活性的定量检测。
该试剂盒主要用于细胞代谢研究，适用于解析动物组织、真菌等样本中纤维素降解途径的酶学特征，亦可拓展至土壤微生物群落功能评估、工业真菌产酶能力评价及纤维素酶系协同作用机制研究。
| 中文名称 | 外切-β-1,4-葡聚糖酶(C1)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro 1,4-β-D-Glucan Cellobilhydrolase (C1) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB3019 |
| 样本类型 | 动物组织、真菌 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 分子 | 外切-β-1，4-葡聚糖酶（C1） |
| 检测指标 | 外切-β-1，4-葡聚糖酶（C1） |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。Reagent I 浑浊或出现白色沉淀是正常现象，使用前摇晃数次混匀。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
注意：Reagent II 有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。
Standard：临用前配制；每瓶加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 10 mg/mL葡萄糖标准品；用不完的试剂 4℃保存 2周。使用 10 mg/mL 葡萄糖标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（μg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 60 μL of 10 mg/mL Standard | 940 | 600 |
| Std.2 | 600 μL of Std.1 (600 μg/mL) | 300 | 400 |
| Std.3 | 600 μL of Std.2 (400 μg/mL) | 600 | 200 |
| Std.4 | 600 μL of Std.3 (200 μg/mL) | 600 | 100 |
| Std.5 | 800 μL of Std.4 (100 μg/mL) | 200 | 80 |
| Std.6 | 500 μL of Std.5 (80 μg/mL) | 500 | 40 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
1. 动物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 真菌：收集 500万真菌到离心管内，用冷 PBS清洗真菌，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎真菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 540 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL离心管中操作）：
| 试剂 | 测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） | 空白管（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 10 | 10 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 0 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 100 | 0 | 0 |
| 混匀，37℃准确反应 2 h。 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 110 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 0 | 0 | 110 |
| Reagent II | 200 | 200 | 200 | 200 |
3. 混匀，沸水浴 10 min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却至室温后 5,000 g，室温离心 5 min，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 540 nm处吸光值。空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 600 μg/mL的ΔA 标准，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (μg/mL)。
2. C1活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：37℃，每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 (U/mg 蛋白)=x×V 反总÷V 样÷Cpr÷T=0.092x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：37℃，每 g组织每分钟催化产生 1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 (U/g 鲜重)=x×V 反总÷V 样×V 样总÷W÷T=0.092x÷W
（3）按真菌数量计算：
单位的定义：37℃，每 104个真菌每分钟催化产生 1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 (U/104 真菌)=x×V 反总÷V 样×V 样总÷N÷T=0.092x÷N
V 反总：酶促反应体积，0.11 mL；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 h=120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：真菌数量，以万计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
货号：BMU103
SuperKine™ 增强型抗体稀释液 (SuperKine™ Enhanced Antibody Dilution Buffer) 是一款即用型、通用型抗体稀释液，...
货号：BMU101
SuperKine™ 增强型ECL发光液（皮克级） (SuperKine™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate) 是一套基于经典...
我们的技术团队为您提供全方位的产品支持服务
根据您的研究目标，提供个性化的实验设计方案
经验丰富的技术专家协助您解决实验中遇到的问题
7x24小时在线技术支持，随时为您答疑解惑
提供免费样品试用，让您先试后买更放心
