人程序性死亡配体1/PD-L1 ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 人程序性死亡配体1/PD-L1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE6036
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human PD-L1 ELISA Kit

产品货号

KTE6036

产品特点：

竞争法设计，灵敏度低至6.25 pg/mL，线性范围12.5–800 pg/mL

预包被人源PD-L1抗体微孔板，减少实验步骤，提升批间一致性

高特异性，对PD-L1类似物无明显交叉反应，背景干扰极低

兼容细胞培养上清、血清、血浆及多种生物液体，样本选择灵活

全套组分（标准品、HRP标记抗体、底物、终止液等）一次配齐，即开即用

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™人程序性死亡配体1/PD-L1 ELISA定量试剂盒是一款基于竞争法原理的高灵敏度ELISA试剂盒，可在细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体中对人源PD-L1进行准确定量。

背景与原理

PD-L1（程序性死亡配体1，B7-H1/CD274）是B7超家族成员，40 kDa I型跨膜蛋白，由290个氨基酸组成，广泛表达于抗原呈递细胞（APCs）、T/B细胞、巨噬细胞、胎盘滋养层细胞、心肌内皮及胸腺皮质上皮等。其与PD-1结合后，通过ITSM基序招募SHP-2磷酸酶，去磷酸化TCR信号通路关键分子，抑制CD4⁺和CD8⁺T细胞增殖与活性，对免疫应答实施负向调控，从而减轻组织损伤并防止自身免疫。EliKine™试剂盒利用竞争法：样本中的PD-L1与HRP标记的PD-L1检测抗体竞争结合预包被微孔板上的PD-L1抗体，HRP催化底物显色，吸光度与样本中PD-L1浓度成反比，实现12.5–800 pg/mL范围内的精确定量。

应用领域

肿瘤免疫微环境研究、免疫检查点抑制剂药效评估、自身免疫疾病机制探索、细胞治疗质量控制、炎症与感染模型分析等细胞分析相关实验。

产品参数

中文名称	人程序性死亡配体1/PD-L1 ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human PD-L1 ELISA Kit
产品货号	KTE6036
反应性	人
检测类型	ELISA
检测方法	竞争法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆#其它生物液体
试剂盒组分	• 人源PD-L1抗体预包被微孔板 • 人源PD-L1蛋白标准品 • HRP标记人源PD-L1检测抗体 •标准品稀释液 • 实验缓冲液 • HRP底物 • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜。
检测范围	12.5 pg/mL - 800 pg/mL
灵敏度	6.25 pg/mL
基因ID	29126
蛋白质ID	Q9NZQ7
蛋白序列链接	http://www.uniprot.org/uniprot/Q9NZQ7
检测指标	PD-L1
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。
保存建议	请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按1:5的比例稀释Sample Diluent (5×)得到1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存30天。1× Sample Diluent用于稀释标准品，血清和血浆样品。

1× Sample Diluent：

1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按1:5的比例稀释Assay Buffer (5×)得到1× Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存30天。1× Assay buffer用于稀释HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody (100×)。

1× Assay Buffer：

Human PD-L1 Standard：加入1 mL 1× Sample Diluent复溶Human PD-L1 Standard得到800 pg/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置15 min并轻轻晃动。

Human PD-L1 Standard：

1× HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用1× Assay buffer对HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody（100×）进行1:100稀释。稀释后的HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody应在稀释后30 min内使用。

1× HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody：

HRP Substrate (TMB)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate (TMB)：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1× Wash Buffer：使用前平衡到室温，用去离子水进行1:20稀释得到1× Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存30天。

1× Wash Buffer：

标准曲线设置

按下表所示，用1× Sample Diluent将800 pg/mL标准品稀释为800、400、200、100、50、25、12.5 pg/mL和0 pg的标准品。

序号	标准品体积	1× Sample Diluent (×体积 μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 µL of 800 pg/mL	0	800
Std.2	500 µL of Std.1 (800 pg/mL)	500	400
Std.3	500 µL of Std.2 (400 pg/mL)	500	200
Std.4	500 µL of Std.3 (200 pg/mL)	500	100
Std.5	500 µL of Std.4 (100 pg/mL)	500	50
Std.6	500 µL of Std.5 (50 pg/mL)	500	25
Std.7	500 µL of Std.6 (25 pg/mL)	500	12.5
Std.8	0	500	0

序号	标准品体积	1× Sample Diluent (×体积 μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 µL of 800 pg/mL	0	800
Std.2	500 µL of Std.1 (800 pg/mL)	500	400
Std.3	500 µL of Std.2 (400 pg/mL)	500	200
Std.4	500 µL of Std.3 (200 pg/mL)	500	100
Std.5	500 µL of Std.4 (100 pg/mL)	500	50
Std.6	500 µL of Std.5 (50 pg/mL)	500	25
Std.7	500 µL of Std.6 (25 pg/mL)	500	12.5
Std.8	0	500	0

序号标准品体积1× Sample Diluent (×体积 μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1× Sample Diluent (×体积 μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1× Sample Diluent (×体积 μL)标准品浓度（pg/mL）Std.11,000 µL of 800 pg/mL0800Std.2500 µL of Std.1 (800 pg/mL)500400Std.3500 µL of Std.2 (400 pg/mL)500200Std.4500 µL of Std.3 (200 pg/mL)500100Std.5500 µL of Std.4 (100 pg/mL)50050Std.6500 µL of Std.5 (50 pg/mL)50025Std.7500 µL of Std.6 (25 pg/mL)50012.5Std.805000Std.11,000 µL of 800 pg/mL0800Std.11,000 µL of 800 pg/mL0800Std.2500 µL of Std.1 (800 pg/mL)500400Std.2500 µL of Std.1 (800 pg/mL)500400Std.3500 µL of Std.2 (400 pg/mL)500200Std.3500 µL of Std.2 (400 pg/mL)500200Std.4500 µL of Std.3 (200 pg/mL)500100Std.4500 µL of Std.3 (200 pg/mL)500100Std.5500 µL of Std.4 (100 pg/mL)50050Std.5500 µL of Std.4 (100 pg/mL)50050Std.6500 µL of Std.5 (50 pg/mL)50025Std.6500 µL of Std.5 (50 pg/mL)50025Std.7500 µL of Std.6 (25 pg/mL)50012.5Std.7500 µL of Std.6 (25 pg/mL)50012.5Std.805000Std.805000

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

1. 细胞培养上清：

2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结20-30 min，然后1,000 g离心15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

2. 血清：

3. 血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后30 min内1,000 g离心15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

3. 血浆：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在24 h内使用，则可以将其储存在2-8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。
每孔加入100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育2 h。
重复步骤2中的洗涤。
每孔加入100 μL 1:100稀释的HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育1 h。
重复步骤2中的洗涤5次。
每孔加入100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育15 min。
每孔加入50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与TMB相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在30 min内，测定每孔450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。

每孔加入100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育2 h。

重复步骤2中的洗涤。

每孔加入100 μL 1:100稀释的HRP-conjugated Human PD-L1 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育1 h。

重复步骤2中的洗涤5次。

每孔加入100 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育15 min。

每孔加入50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与TMB相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在30 min内，测定每孔450 nm处的吸光值。

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均OD值，并减去零浓度（Std.8）平均OD值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为x轴，各标准品的平均吸光度为y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

计算每个标准品和样品的复孔平均OD值，并减去零浓度（Std.8）平均OD值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为x轴，各标准品的平均吸光度为y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。

文献引用

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