总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(微量法)-CheKine™

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

注意事项

• 正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
• 对于组织样本及细胞样本等，可通过测定蛋白浓度来进行样本间结果均一化。推荐使用亚科因货号：KTD3001 的蛋白质定量试剂盒（BCA法）。
• 本试剂盒兼容分光光度计检测，请按照分光光度计检测要求按比例调节检测试剂配制量。如有疑问，可咨询本司技术人员（400-6800-830）。
• 建议实验者自行建立标准曲线以提高结果准确度。如未自行建立标准曲线，可参考结果展示部分的典型标准曲线公式进行结果计算。
• 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
• 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

试剂准备

标准品配制

称取 1 mg标准品，加入 1 mL去离子水充分溶解得 1 mg/mL标准品，分装后-20℃避光保存 1个月。取 4 µL 1 mg/mL标准品加入 996 µL Extraction Buffer的稀释液得 4 µg/mL标准品，以 Extraction Buffer的稀释液作为空白孔。每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。因 Extraction Buffer中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取相同样本，把 Extraction Buffer换成去离子水提取制备。

• 动物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆，8000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
• 植物组织：称取约 0.1 g 的样本，加入 1 mL Extraction Buffer 捣碎，冰浴超声破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），8000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
• 细胞或细菌：收集 10⁶个细胞或细菌到离心管内，用预冷 PBS 清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞或细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），8000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
• 血清：直接测定。

实验步骤

1. 酶标仪准备：预热 30 min以上，调节波长到 412 nm。
2. 检测体系配制：在 96孔板中按照如下方式操作，标准曲线一般只做 1次。

3. 吸光度检测：迅速混匀后立即测定 412 nm处的吸光度值，记为 A1，37℃避光孵育 10 min，准时读取吸光度值，记为 A2。

结果计算

自动计算

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手动计算

以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。

1. 数据处理
   计算ΔA=A2-A1, ΔΔA_测定=ΔA_测定-ΔA_空白, ΔΔA_标准=ΔA_标准-ΔA_空白。
2. 标准曲线绘制
   以标准品浓度为 y轴，ΔΔA_标准为 x轴，绘制标准曲线。将ΔΔA_测定代入方程得到 y值（μg/mL）。
3. 样本 T-GSH含量计算

• 按样本质量计算
  T-GSH 含量 (µg/g 鲜重)=y×n×V_样总÷W=10×y÷W
• 按细胞或细菌数量计算:
  T-GSH 含量 (µg/10⁴)=y×n×V_样总÷500=y÷50
• 按液体体积计算
  T-GSH 含量 (µg/mL)=10×y
• 按蛋白浓度数量计算
  T-GSH 含量 (µg/mg prot)=y×n×V_样÷(V_样×C_pr)=10×y÷C_pr

V_样总：样本提取体积，1 mL；V_样：加入样本，20 µL；n：加入反应体系的样本相当于稀释 10 倍；W：样品质量，g；V_样总：样本提取体积，1 mL；500：细胞或细菌数量，以 10⁴为单位；C_pr：样本蛋白质浓度，mg/mL。